সরাসরি RT-qPCR কিট
বর্ণনা
ডাইরেক্ট RT-qPCR কিট আলাদাভাবে প্যাকেজ করা RT-qPCR বাফার এবং উচ্চ দক্ষ এনজাইম প্রদান করেমিশ্রণ (Taq、M-MLV、RI), এটি ব্যাক-এন্ড কিট এবং সিস্টেম তৈরির জন্য সুবিধাজনক করে তোলেসমন্বয়, সহজ যাচাইয়ের মধ্যে।
স্পেসিফিকেশন
500T, 50,000T
কিট উপাদান
কিট বিষয়বস্তু (20 μL প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 টি | 50,000 টি | |
সরাসরি এনজাইম মিশ্রণ | 500 μL×1 | 50 মি.লি×1 |
2× ডাইরেক্ট RT-qPCR বাফার | 1 মি.লি×5 | 500 মি.লি×1 |
নির্দেশ | 1 | 1 |
অপারেটিং পদক্ষেপ
বিকারক প্রস্তুত করার আগে, কিটের সমস্ত বিকারকগুলি ঘরের তাপমাত্রায় গলাতে হবে এবং আলতোভাবে মিশ্রিত করতে হবে।
A: প্রস্তুত করা of টেমপ্লেট এবং বিকারক
1. প্রস্তুত RNA টেমপ্লেট প্রস্তুত করুন (আরএনএ টেমপ্লেট নিষ্কাশন এবং বিশুদ্ধ করতে ফোরজিন টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিট সিরিজের কিট ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়) বা নমুনা ক্র্যাকিং পণ্য (ফোরজিন লাইসিস সিস্টেম ব্যবহার করা বাঞ্ছনীয়), নির্দিষ্ট প্রাইমার (10 μM) এবং অন্যান্য প্রাসঙ্গিক ভোগ্য সামগ্রী, যন্ত্র।
2. 2× ডাইরেক্ট RT-qPCR বাফার, RNase-ফ্রি ddH2O এবং 20× ROX রেফারেন্স ডাই রাখুন (যদি এটি's প্রয়োজন) বাক্সে বরফ দিয়ে, এগুলোকে স্বাভাবিকভাবে গলিয়ে আলতো করে মেশাতে হবে।
B: প্রস্তুত করা of RT-qPCR পদ্ধতি
টেবিল 1 : প্রস্তুত করা of RT-qPCR sসিস্টেম
উপাদান | আয়তন | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
2× ডাইরেক্ট RT-qPCR বাফার | 10 μL | 1× |
সরাসরি এনজাইম মিশ্রণ | 1μL | |
ফরোয়ার্ড প্রাইমার (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
বিপরীত প্রাইমার (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
প্রোব (4 μM) | 1μL | 200nM |
টেমপ্লেট(RNA বা Lysate) | X μL | |
20×ROX রেফারেন্স ডাই | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
মোট আয়তন | 20μL |
C: সেট দ্য RT-qPCR প্রতিক্রিয়া কার্যক্রম
টেবিল 2 : RT-qPCR প্রতিক্রিয়াon কার্যক্রম বিন্যাস (জন্য উদাহরণ: দুই-পদক্ষেপ পদ্ধতি)
ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | সাইকেল | বিষয়বস্তু | |
1 | 50℃ | 15 মিনিট | 1* | 1 | বিপরীত প্রতিলিপি |
2 | 95℃ | 1 মিনিট | 1 | প্রি-ডেনেচুরেশন | |
3 | 95℃ | 10 সেকেন্ড | 40-45 | বিকৃতকরণ | |
60℃ | 30 সেকেন্ড 2* | অ্যানিল/এক্সটেনশন |
স্টোরেজ এবং শেলফ লাইফ
-কিটটি -20 এ সংরক্ষণ করা উচিত± 5℃.বৈধতার সময়কাল 12 মাস।
-পুনরাবৃত্ত ফ্রিজ-থাও চক্র (<5 চক্র) এড়িয়ে চলুন।