সেল ডাইরেক্ট RT qPCR কিট—SYBR GREEN I ডাইরেক্ট সেল লাইসিস সেল রেডি ওয়ান-স্টেপ qRT-PCR কিটস
বর্ণনা
এই কিটটি একটি অনন্য লাইসিস বাফার সিস্টেম ব্যবহার করে যা দ্রুত RT-qPCR প্রতিক্রিয়ার জন্য সংষ্কৃত কোষের নমুনা থেকে RNA মুক্ত করতে পারে, যার ফলে সময়সাপেক্ষ এবং শ্রমসাধ্য আরএনএ পরিশোধন প্রক্রিয়াটি দূর হয়।আরএনএ টেমপ্লেট মাত্র 7 মিনিটের মধ্যে পাওয়া যাবে।5×ডাইরেক্ট আরটি মিক্স এবং 2×কিট দ্বারা প্রদত্ত সরাসরি qPCR মিক্স-SYBR রিএজেন্টগুলি দ্রুত এবং কার্যকরভাবে রিয়েল-টাইম পরিমাণগত PCR ফলাফল পেতে পারে।
5×ডাইরেক্ট আরটি মিক্স এবং 2×ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-SYBR এর শক্তিশালী ইনহিবিটর সহনশীলতা রয়েছে এবং নমুনার লাইসেট সরাসরি RT-qPCR-এর টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।এই কিটটিতে রয়েছে অনন্য আরএনএ হাই-অ্যাফিনিটি ফোরজিন রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ, এবং হট ডি-টাক ডিএনএ পলিমারেজ, ডিএনটিপি, এমজিসিএল2, প্রতিক্রিয়া বাফার, পিসিআর অপ্টিমাইজার এবং স্টেবিলাইজার।
স্পেসিফিকেশন
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
কিট উপাদান
| পার্ট I | বাফার CL |
| ফোরজিন প্রোটিজ প্লাস II | |
| বাফার ST | |
| দ্বিতীয় খণ্ড | ডিএনএ ইরেজার |
| 5× ডাইরেক্ট আরটি মিক্স | |
| 2× ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-SYBR | |
| 50× ROX রেফারেন্স ডাই | |
| RNase-মুক্ত ddH2O | |
| নির্দেশনা | |
বৈশিষ্ট্য ও সুবিধা
■সহজ এবং কার্যকর: সেল ডাইরেক্ট আরটি প্রযুক্তির সাহায্যে, আরএনএ নমুনা মাত্র 7 মিনিটের মধ্যে পাওয়া যায়।
■ নমুনার চাহিদা ছোট, যত কম 10টি কোষ পরীক্ষা করা যেতে পারে।
■ উচ্চ থ্রুপুট: এটি দ্রুত 384, 96, 24, 12, 6-ওয়েল প্লেটে সংষ্কৃত কোষে RNA সনাক্ত করতে পারে।
■ ডিএনএ ইরেজার দ্রুত প্রকাশিত জিনোম অপসারণ করতে পারে, পরবর্তী পরীক্ষামূলক ফলাফলের উপর প্রভাব অনেক কমিয়ে দিতে পারে।
■ অপ্টিমাইজ করা RT এবং qPCR সিস্টেম দ্বি-পদক্ষেপ RT-PCR বিপরীত প্রতিলিপিকে আরও দক্ষ করে তোলে এবং পিসিআরকে আরও সুনির্দিষ্ট করে, এবং RT-qPCR প্রতিক্রিয়া প্রতিরোধকগুলির প্রতি আরও প্রতিরোধী করে তোলে।
কিট অ্যাপ্লিকেশন
প্রয়োগের সুযোগ: সংষ্কৃত কোষ।
- নমুনা লাইসিস দ্বারা প্রকাশিত RNA: শুধুমাত্র এই কিটের RT-qPCR টেমপ্লেটের জন্য প্রযোজ্য।
- কিটটি নিম্নলিখিত উদ্দেশ্যে ব্যবহার করা যেতে পারে: জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ, siRNA-মধ্যস্থিত জিন সাইলেন্সিং প্রভাবের যাচাইকরণ, ড্রাগ স্ক্রীনিং ইত্যাদি।
ডায়াগ্রাম
স্টোরেজ এবং শেলফ লাইফ
এই কিটের অংশ I 4℃ এ সংরক্ষণ করা উচিত;পার্ট II -20℃ এ সংরক্ষণ করা উচিত।
Foregene Protease Plus II 4 এ সংরক্ষণ করা উচিত℃, -20 ℃ এ হিমায়িত করবেন না।
বিকারক 2×সরাসরি qPCR মিক্স-SYBR -20 এ সংরক্ষণ করা উচিত℃অন্ধকারে;ঘন ঘন ব্যবহার করা হলে, এটি 4 এও সংরক্ষণ করা যেতে পারেস্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য ℃ (10 দিনের মধ্যে ব্যবহার করুন)।
রিয়েল টাইম পিসিআর প্রাইমার ডিজাইনের নীতি
ফরোয়ার্ড প্রাইমার এবং রিভার্স প্রাইমার
রিয়েল টাইম পিসিআর এর জন্য প্রাইমার ডিজাইন খুবই গুরুত্বপূর্ণ।প্রাইমারগুলি পিসিআর পরিবর্ধনের নির্দিষ্টতা এবং দক্ষতার সাথে সম্পর্কিত, এবং নিম্নলিখিত নীতিগুলির রেফারেন্স দিয়ে ডিজাইন করা যেতে পারে:
প্রাইমারের দৈর্ঘ্য: 18-30bp।
জিসি বিষয়বস্তু: 40-60%।
Tm মান: প্রাইমার ডিজাইন সফ্টওয়্যার, যেমন প্রাইমার 5, প্রাইমারের Tm মান দিতে পারে।আপস্ট্রিম এবং ডাউনস্ট্রিম প্রাইমারের টিএম মান যতটা সম্ভব কাছাকাছি হওয়া উচিত।Tm গণনার সূত্রটিও ব্যবহার করা যেতে পারে: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।পিসিআর সম্পাদন করার সময়, প্রাইমার টিএম মানের 5 ডিগ্রি সেলসিয়াসের নীচে একটি তাপমাত্রা সাধারণত অ্যানিলিং তাপমাত্রা হিসাবে নির্বাচিত হয় (অ্যানিলিং তাপমাত্রার অনুরূপ বৃদ্ধি পিসিআর প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্টতা বাড়িয়ে তুলতে পারে)।
প্রাইমার এবং পিসিআর পণ্য:
ডিজাইন প্রাইমার পিসিআর পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 100-150bp হয়।
টেমপ্লেটের সেকেন্ডারি স্ট্রাকচারাল এলাকায় ডিজাইন প্রাইমারগুলি যতটা সম্ভব এড়ানো উচিত।
আপস্ট্রিম এবং ডাউনস্ট্রিম প্রাইমারের 3′ প্রান্তের মধ্যে 2 বা তার বেশি পরিপূরক ঘাঁটি তৈরি করা এড়িয়ে চলুন।
প্রাইমার 3′ টার্মিনাল বেস 3টি অতিরিক্ত পরপর G বা C সহ উপস্থিত থাকতে পারে না।
প্রাইমারগুলিতে পরিপূরক কাঠামো থাকতে পারে না, অন্যথায় একটি হেয়ারপিন গঠন তৈরি হবে, যা পিসিআর পরিবর্ধনকে প্রভাবিত করবে।
ATCG প্রাইমার সিকোয়েন্সে যতটা সম্ভব সমানভাবে বিতরণ করা উচিত এবং 3′ টার্মিনাল বেস টি হিসাবে এড়ানো উচিত।
পরিশিষ্ট 1: সেল ডাইরেক্ট RT-qPCR কিট কম্পোনেন্ট সাপ্লিমেন্ট প্যাক
1.সেল লাইসিস সমাধান
|
| |||
| কিট উপাদান (24-ওয়েল লাইসিস সিস্টেম / ওয়েল) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 টি | 500 টি | ||
| অংশআমি | বাফার CL | 20 মিলি | 100 মিলি |
| ফোরজিন প্রোটিজ প্লাস II | 400 μl | 1 মিলি × 2 | |
| বাফার ST | 1 মিলি × 2 | 10 মিলি | |
| অংশ২ | ডিএনএ ইরেজার | 400 μl | 1 মিলি × 2 |
2.আরটি মিক্স
|
| |
| কিট উপাদান (20 μl প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | DRT-01011-B1 |
| 200 টি | |
| 5× ডাইরেক্ট আরটি মিক্স | 800 μl |
| RNase-মুক্ত ddH2O | 1.7 মিলি × 2 |
|
| ||
| কিট উপাদান (20 μl প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 টি | 1000 টি | |
| 2× ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-SYBR | 1 মিলি × 2 | 1.7 মিলি × 6 |
| 50× ROX রেফারেন্স ডাই | 40 μl | 200 μl |
| RNase-মুক্ত ddH2O | 1.7 মিলি | 10 মিলি |
নির্দেশিকা ম্যানুয়াল:
