সমস্যা বিশ্লেষণ গাইড

আপনি যে সমস্যার সম্মুখীন হতে পারেন তার নিম্নলিখিত বিশ্লেষণউদ্ভিদ মোটRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

স্পিন কলাম আটকে আছে

স্পিন কলামের ব্লকেজের কারণে RNA ফলন হ্রাস পাবে বা এমনকি RNA প্রাপ্তির জন্য বিশুদ্ধ হতে অক্ষম হবে, এবং প্রাপ্ত RNA এর গুণমান কম হবে।

সাধারণ কারণ বিশ্লেষণ:

1. নমুনা সম্পূর্ণরূপে ভাঙ্গা হয় না.

অসম্পূর্ণ নমুনা ফ্র্যাগমেন্টেশন ডিএনএ-ক্লিনিং কলামকে ব্লক করতে পারে, যা আরএনএ ফলন এবং গুণমানকেও প্রভাবিত করতে পারে।আমরা সুপারিশ করি যে নমুনা বিভক্তকরণ সম্পাদন করার সময়, যতটা সম্ভব নমুনার কোষ প্রাচীর এবং কোষের ঝিল্লির মতো টিস্যুগুলিকে ভেঙে ফেলার জন্য পর্যাপ্ত পরিমাণে তরল নাইট্রোজেন দ্রুত পিষে নিন।পলিফেনল পলিস্যাকারাইডের উদ্ভিদ নমুনার জন্য, আমরা আপনাকে প্ল্যান্ট টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিট প্লাস ব্যবহার করার পরামর্শ দিই।

2. ডিএনএ-ক্লিনিং কলাম বিচ্ছিন্ন সুপারন্যাট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করুন, সম্ভাব্য কোষের ধ্বংসাবশেষ গুলিকে অ্যাসপিরেট করুন।

অ্যাসপিরেটেড কোষ ধ্বংসাবশেষ RNA শোষণ পদ্ধতির সময় শুধুমাত্র RNA-কলামকে আটকে রাখতে পারে (প্রক্রিয়ার ধাপ 5, পলিস্যাকারাইড পলিফেনল পদ্ধতির ধাপ 6 দেখুন)।আমরা সুপারিশ করি যে কোষের ধ্বংসাবশেষকে উচ্চাকাঙ্খিত করা এড়াতে এই সুপারন্যাট্যান্টকে অ্যাসপিরেট করার সময় অবশ্যই যত্ন নেওয়া উচিত।

3. নমুনার প্রাথমিক পরিমাণ খুব বড়।

অত্যধিক নমুনা ব্যবহারের ফলে বাফার PRL1 বা বাফার PSL1 দ্বারা কোষের অসম্পূর্ণ নমুনা ফ্র্যাগমেন্টেশন বা অসম্পূর্ণ lysis হবে, যার ফলে পরিশোধন কার্যক্রমের জন্য একটি আটকে থাকা পরিশোধন কলাম হবে।প্ল্যান্ট টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিটে একটি চালিত নমুনার একক পরিশোধন প্রতি প্রাথমিক সর্বাধিক 50 মিলিগ্রাম রয়েছে।পলিফেনল পলিস্যাকারাইডের উদ্ভিদের নমুনার জন্য, আমরা আপনাকে প্ল্যান্ট টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিট প্লাস ব্যবহার করার পরামর্শ দিই।

4. সেন্ট্রিফিউজের তাপমাত্রা খুব কম।

নমুনা টিস্যুর তরল নাইট্রোজেন ব্যাঘাত ব্যতীত সম্পূর্ণ আরএনএ বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন, সমস্ত পদক্ষেপ ঘরের তাপমাত্রায় (20-25 °সে) সঞ্চালিত হয়।কিছু নিম্ন-তাপমাত্রার সেন্ট্রিফিউজের তাপমাত্রা 20 °C এর নিচে থাকে, যা DNA-ক্লিনিং কলাম এবং/অথবা RNA-শুধু কলামে বাধা সৃষ্টি করতে পারে।যদি এটি ঘটে থাকে, সেন্ট্রিফিউজের তাপমাত্রা 20-25 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সেট করুন এবং লাইসিস মিশ্রণ এবং/অথবা ইথানল বিচ্ছেদ সুপারনাট্যান্টকে 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে পূর্ব-উষ্ণ করুন।

কোন RNA নিষ্কাশিত বা RNA ফলন কম নয়

সাধারণত অনেকগুলি কারণ রয়েছে যা পুনরুদ্ধারের দক্ষতাকে প্রভাবিত করে, যেমন: নমুনা RNA বিষয়বস্তু, অপারেশন পদ্ধতি, ইলুশন ভলিউম ইত্যাদি।

নিম্নরূপ সাধারণ কারণ বিশ্লেষণ:

1.অপারেশনের সময় একটি বরফ স্নান বা নিম্ন তাপমাত্রা (4°C) সেন্ট্রিফিউগেশন করা হয়েছিল।

পরামর্শ: পুরো প্রক্রিয়ায় ঘরের তাপমাত্রায় (15-25 ডিগ্রি সেলসিয়াস) কাজ করুন, বরফের স্নান এবং কম তাপমাত্রার সেন্ট্রিফিউগেশন করবেন না।

       2.নমুনার অনুপযুক্ত সংরক্ষণ বা নমুনা দীর্ঘমেয়াদী সংরক্ষণের কারণে RNA ক্ষয়প্রাপ্ত হয়েছে।

সুপারিশ: সদ্য সংগ্রহ করা নমুনাগুলিকে দ্রুত তরল নাইট্রোজেনে হিমায়িত করা উচিত, এবং তারপরে -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে দীর্ঘ সময়ের জন্য সংরক্ষণ করা উচিত, নমুনাগুলি বারবার জমা করা এবং গলানো এড়িয়ে চলুন;অথবা অবিলম্বে RNA স্টেবিলাইজার RNAlater সলিউশনে (প্রাণীর নমুনা) নমুনা ভিজিয়ে রাখুন।

       3.অপর্যাপ্ত নমুনা ফ্র্যাগমেন্টেশন এবং লাইসিস পরিশোধন কলামে বাধা সৃষ্টি করে।

পরামর্শ: টিস্যু গ্রাইন্ড করার সময়, অনুগ্রহ করে নিশ্চিত করুন যে টিস্যুটি পর্যাপ্ত পরিমাণে মাটিতে রয়েছে এবং দ্রুত এটিকে পূর্ব-প্রস্তুত বাফার PSL1 এ স্থানান্তর করুন (নিশ্চিত করুন যে β-ME এর সঠিক অনুপাত যোগ করা হয়েছে, পদ্ধতির 1 ধাপ দেখুন)।

4. eluent ভুলভাবে যোগ করা হয়েছে.

পরামর্শ: RNase-মুক্ত ddH নিশ্চিত করুন₂O পরিশোধন কলাম ঝিল্লির মাঝখানে ড্রপ করা হয়।

5. পরম ইথানলের সঠিক ভলিউম বাফার PSL2 বা বাফার PRW2 তে যোগ করা হয়নি।

পরামর্শ: অনুগ্রহ করে নির্দেশাবলী অনুসরণ করুন, বাফার PSL2 এবং Buffer PRW2-এ পরম ইথানলের সঠিক ভলিউম যোগ করুন এবং কিট ব্যবহার করার আগে ভালভাবে মিশ্রিত করুন।

6. টিস্যুর নমুনার পরিমাণ অনুপযুক্ত।

পরামর্শ: বাফার PSL1 এর 500 μl প্রতি 50 মিলিগ্রাম টিস্যু ব্যবহার করুন।অত্যধিক টিস্যু ব্যবহার করলে নিষ্কাশিত RNA এর পরিমাণ কমে যাবে এবং ফলে RNA এর বিশুদ্ধতাও কমে যাবে।আমরা দৃঢ়ভাবে সুপারিশ করি যে প্রাথমিক নমুনা ডোজ RNA নিষ্কাশন অপারেশন প্রতি 50 মিলিগ্রামের বেশি হওয়া উচিত নয়।

7. অনুপযুক্ত ইলিউশন ভলিউম বা অসম্পূর্ণ ইলিউশন।

পরামর্শ: পরিশোধন কলামের ইলুয়েন্ট ভলিউম 50-200 μl;ইলুশন প্রভাব সন্তোষজনক না হলে, প্রিহিটেড RNase-ফ্রি ddH যোগ করার পরে ঘরের তাপমাত্রায় সময় বাড়ানোর পরামর্শ দেওয়া হয়।₂O, যেমন 5-10min.

8. বাফার PRW2 দিয়ে ধোয়ার পর পরিশোধন কলামে ইথানলের অবশিষ্টাংশ থাকে।

   পরামর্শ: যদি খালি টিউবটি 1 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয় এবং বাফার PRW2-তে ধোয়ার পরেও ইথানল অবশিষ্ট থাকে, তাহলে আপনি খালি টিউব সেন্ট্রিফিউগেশনের সময় 2 মিনিটে বাড়িয়ে দিতে পারেন, বা অবশিষ্ট ইথানল সম্পূর্ণরূপে অপসারণের জন্য 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় পরিশোধন কলাম রাখতে পারেন।

9. কিটটি ভুলভাবে ব্যবহার করা হয়েছিল।

   পরামর্শ: পলিফেনলিক পলিস্যাকারাইডের উদ্ভিদ নমুনার জন্য, সাধারণ কিট ব্যবহার করে যেমন প্ল্যান্ট টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিট আদর্শ আরএনএ নমুনা পেতে সক্ষম নাও হতে পারে।আমরা আপনাকে প্ল্যান্ট টোটাল আরএনএ আইসোলেশনকিট প্লাস ব্যবহার করার পরামর্শ দিই, যা বিশেষভাবে পলিফেনলিক পলিস্যাকারাইড উদ্ভিদের নমুনার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।পলিফেনল এবং পলিস্যাকারাইড উদ্ভিদের নমুনা থেকে আরএনএ বের করার জন্য বিশেষভাবে একটি কিট তৈরি করা হয়েছে।

OD260/OD280 মান কম

ডিডিএইচ সহ আরএনএ ইলুশন₂O এবং স্পেকট্রোফোটোমিটার রিডিংয়ের জন্য ব্যবহার করলে OD260/OD280 মান কম হয়।আমরা 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-Free ddH এর পরিবর্তে) ব্যবহার করার পরামর্শ দিই₂O থেকে RNA নির্মূল করতে) তুলনামূলকভাবে সঠিক OD260/OD280 মান পেতে, 19 পৃষ্ঠায় "RNA ঘনত্ব এবং পরিশোধন পরীক্ষা" দেখুন।

বিশুদ্ধ আরএনএ ক্ষয়প্রাপ্ত হয়

বিশুদ্ধ RNA-এর গুণমান নমুনা সংরক্ষণ, RNase দূষণ এবং ম্যানিপুলেশনের মতো বিষয়গুলির সাথে সম্পর্কিত।

সাধারণ কারণ বিশ্লেষণ:

1. টিস্যু নমুনা সংগ্রহের পরে সময়মতো সংরক্ষণ করা হয়নি।

    প্রস্তাবনা: সংগ্রহের পরে যদি টিস্যুর নমুনাগুলি সময়মতো ব্যবহার না করা হয়, অনুগ্রহ করে তাৎক্ষণিকভাবে কম তাপমাত্রায় তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করুন বা তরল নাইট্রোজেনে দ্রুত জমাট বাঁধার পরে দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে স্থানান্তর করুন, বা অবিলম্বে নমুনাগুলিকে RNA স্টেবিলাইজার RNAlater সলিউশনে (প্রাণীর নমুনা) নিমজ্জিত করুন।RNA নিষ্কাশনের জন্য, সদ্য সংগ্রহ করা টিস্যু নমুনা ব্যবহার করার চেষ্টা করুন।

2. টিস্যুর নমুনা বারবার জমা করা এবং গলানো।

   পরামর্শ: টিস্যুর নমুনা সংরক্ষণ করার সময়, সংরক্ষণের জন্য সেগুলিকে ছোট ছোট টুকরো করে কেটে নেওয়া ভাল, এবং বারবার জমাট বাঁধা এবং নমুনাগুলি গলানোর ফলে সৃষ্ট RNA-এর অবক্ষয় এড়াতে ব্যবহার করার সময় তাদের একটি অংশ বের করে নেওয়া ভাল।

3.RNase অপারেশন রুমে প্রবর্তন করা হয় বা ডিসপোজেবল গ্লাভস, মাস্ক ইত্যাদি পরিধান করা হয় না।

   পরামর্শ: RNA নিষ্কাশন পরীক্ষাগুলি পৃথক RNA অপারেশনে সর্বোত্তমভাবে সঞ্চালিত হয়, এবং পরীক্ষাগারের টেবিলটি পরীক্ষার আগে পরিষ্কার করা উচিত, এবং RNase এর প্রবর্তনের ফলে RNA ক্ষয় এড়াতে পরীক্ষার সময় নিষ্পত্তিযোগ্য গ্লাভস এবং মুখোশ পরিধান করা উচিত।

4. রিএজেন্ট ব্যবহারের সময় RNase দ্বারা দূষিত হয়।

   পরামর্শ: সম্পর্কিত পরীক্ষার জন্য উদ্ভিদের মোট RNA নিষ্কাশন কিটগুলির একটি নতুন সিরিজ দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

5. RNA ম্যানিপুলেশনের জন্য ব্যবহৃত সেন্ট্রিফিউজ টিউব এবং পাইপেট টিপস RNase দ্বারা দূষিত।

পরামর্শ: নিশ্চিত করুন যে RNA নিষ্কাশনে ব্যবহৃত সেন্ট্রিফিউজ টিউব, পাইপেট টিপস, পাইপেট ইত্যাদি সবই RNase-মুক্ত।

নির্দেশিকা ম্যানুয়াল:

উদ্ভিদ মোট RNA বিচ্ছিন্নতা কিট নির্দেশিকা ম্যানুয়াল