(96-ওয়েল) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR কিট – SYBR Green I
বর্ণনা
দ্য(96-ভাল) QuickEasyTM সেল ডাইরেক্ট RT-qPCR কিট-SYBR সবুজ আইপ্রদান করেএকটি অনন্য লিসিস বাফার সিস্টেমto দ্রুত আরএনএ প্রকাশ করুনসংস্কৃত কোষ থেকেRT-qPCR প্রতিক্রিয়ার জন্য নমুনা, সময়সাপেক্ষ এবং শ্রমসাধ্য দূর করেRNA পরিশোধন প্রক্রিয়া, এবং প্রয়োজনীয় RNA টেমপ্লেট পেতে মাত্র 7 মিনিট সময় লাগে।দ্য5× ডাইরেক্ট আরটি মিক্সএবং2× ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-SYBRবক্সে প্রদান করা যাবে দ্রুত এবংকার্যকরভাবে রিয়েল-টাইম পরিমাণগত প্রাপ্তপিসিআর ফলাফল।
5× ডাইরেক্ট RT মিক্স এবং 2 × ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-SYBR এর শক্তিশালী ইনহিবিটর সহনশীলতা রয়েছে এবং দক্ষ রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন এবং নির্দিষ্ট পরিবর্ধনের জন্য একটি টেমপ্লেট হিসাবে পরীক্ষা করার জন্য নমুনার লাইসেট ব্যবহার করতে পারে।রিএজেন্টে রয়েছে ফোরজিন অনন্য রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ যার সাথে RNA-এর জন্য উচ্চ সম্পর্ক রয়েছে, সেইসাথে Hot D-Tak DNA পলিমারেজ, dNTPs, MgCl2 , প্রতিক্রিয়া বাফার, পিসিআর অপ্টিমাইজার এবং স্টেবিলাইজার, এবং দ্রুত, সহজে এবং সঠিকভাবে নমুনা সনাক্ত করতে লাইসিস বাফারের সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে এবং এতে উচ্চ সংবেদনশীলতা, শক্তিশালী নির্দিষ্টতা এবং ভাল স্থিতিশীলতার বৈশিষ্ট্য রয়েছে।
কিটটির লক্ষ্য 96-ভালভাবে সংস্কৃত কোষের মাইক্রো-সিস্টেম লাইসিস, এবং এতে ভাল অভিন্নতা এবং সামঞ্জস্য রয়েছে;কিটের উপাদানগুলি 96টি লাইসিস প্রতিক্রিয়া, 96টি বিপরীত প্রতিলিপি প্রতিক্রিয়া এবং 96×2 qPCR প্রতিক্রিয়া প্রদান করে, যা 96-ওয়েল সেল প্লেটকে একবার ব্যবহারের জন্য পূরণ করতে পারে, বারবার খোলা, জমাট এবং বিকারকগুলির গলানোর কারণে সৃষ্ট দূষণ এড়াতে এবং বিকারক কর্মক্ষমতা হ্রাস পায়।
কিট উপাদান
| কিট রচনা ( 50 μএল লাইসিস সিস্টেম/20 μLRT প্রতিক্রিয়া সিস্টেম /20μL qPCR প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | DRT-03011 | মন্তব্য | |
| 96T | |||
| অংশI | বাফারCL | 5 মি.লি | সেললাইসিস |
| ফরজিনপ্রোটিজ প্লাস II | 100 μL | ||
| বাফারST | 500 μL | ||
| অংশ II | ডিএনএইরেজার | 100 μL | |
| 5× ডাইরেক্ট আরটি মিক্স | 400 μL | RT | |
| 2× ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-এসওয়াইবিআর | 1 মিL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX রেফারেন্স ডাই | 400µL | ||
| RNase- বিনামূল্যেডিডিএইচ2 O | 1.7 মিলি |
| |
| Mবার্ষিক | 1 টুকরা | 1 পরিবেশন | |
*: লাইসিস রিএজেন্ট ডিএনএ ইরেজার কিটের দ্বিতীয় অংশে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছে;সেল লাইসিস, আরটি এবং কিউপিসিআর উপাদানগুলি আলাদাভাবে কেনা যেতে পারে।
বৈশিষ্ট্য ও সুবিধা
■সহজ এবং কার্যকর: সেল ডাইরেক্ট আরটি প্রযুক্তির সাহায্যে, আরএনএ নমুনা মাত্র 7 মিনিটের মধ্যে পাওয়া যায়।
■ নমুনার চাহিদা ছোট, যত কম 10টি কোষ পরীক্ষা করা যেতে পারে।
■ উচ্চ থ্রুপুট: এটি দ্রুত 384, 96, 24, 12, 6-ওয়েল প্লেটে সংষ্কৃত কোষে RNA সনাক্ত করতে পারে।
■ ডিএনএ ইরেজার দ্রুত প্রকাশিত জিনোম অপসারণ করতে পারে, পরবর্তী পরীক্ষামূলক ফলাফলের উপর প্রভাব অনেক কমিয়ে দিতে পারে।
■ অপ্টিমাইজ করা RT এবং qPCR সিস্টেম দ্বি-পদক্ষেপ RT-PCR বিপরীত প্রতিলিপিকে আরও দক্ষ করে তোলে এবং পিসিআরকে আরও সুনির্দিষ্ট করে, এবং RT-qPCR প্রতিক্রিয়া প্রতিরোধকগুলির প্রতি আরও প্রতিরোধী করে তোলে।
কিট অ্যাপ্লিকেশন
প্রয়োগের সুযোগ: সংষ্কৃত কোষ।
- নমুনা লাইসিস দ্বারা প্রকাশিত RNA: শুধুমাত্র এই কিটের RT-qPCR টেমপ্লেটের জন্য প্রযোজ্য।
- কিটটি নিম্নলিখিত উদ্দেশ্যে ব্যবহার করা যেতে পারে: জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ, siRNA-মধ্যস্থিত জিন সাইলেন্সিং প্রভাবের যাচাইকরণ, ড্রাগ স্ক্রীনিং ইত্যাদি।
স্টোরেজ এবং শেলফ লাইফ
এই কিটের অংশ I 4 এ সংরক্ষণ করা উচিত℃;পার্ট II -20℃ এ সংরক্ষণ করা উচিত।
Foregene Protease Plus II 4 এ সংরক্ষণ করা উচিত℃, -20 ℃ এ হিমায়িত করবেন না।
বিকারক 2×সরাসরি qPCR মিক্স-টাকমান -20 এ সংরক্ষণ করা উচিত℃অন্ধকারে;ঘন ঘন ব্যবহার করা হলে, এটি 4 এও সংরক্ষণ করা যেতে পারেস্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য ℃ (10 দিনের মধ্যে ব্যবহার করুন)।
রিয়েল টাইম পিসিআর প্রাইমার ডিজাইনের নীতি
ফরোয়ার্ড প্রাইমার এবং রিভার্স প্রাইমার
রিয়েল টাইম পিসিআর এর জন্য প্রাইমার ডিজাইন খুবই গুরুত্বপূর্ণ।প্রাইমারগুলি পিসিআর পরিবর্ধনের নির্দিষ্টতা এবং দক্ষতার সাথে সম্পর্কিত, এবং নিম্নলিখিত নীতিগুলির রেফারেন্স দিয়ে ডিজাইন করা যেতে পারে:
- প্রাইমারের দৈর্ঘ্য: 18-30bp।
- জিসি বিষয়বস্তু: 40-60%।
- Tm মান: প্রাইমার ডিজাইন সফ্টওয়্যার, যেমন প্রাইমার 5, প্রাইমারের Tm মান দিতে পারে।আপস্ট্রিম এবং ডাউনস্ট্রিম প্রাইমারের টিএম মান যতটা সম্ভব কাছাকাছি হওয়া উচিত।Tm গণনার সূত্রটিও ব্যবহার করা যেতে পারে: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)।পিসিআর সম্পাদন করার সময়, প্রাইমার টিএম মানের 5 ডিগ্রি সেলসিয়াসের নীচে একটি তাপমাত্রা সাধারণত অ্যানিলিং তাপমাত্রা হিসাবে নির্বাচিত হয় (অ্যানিলিং তাপমাত্রার অনুরূপ বৃদ্ধি পিসিআর প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্টতা বাড়িয়ে তুলতে পারে)।
- প্রাইমার এবং পিসিআর পণ্য:
- ডিজাইন প্রাইমার পিসিআর পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 100-150bp হয়।
- টেমপ্লেটের সেকেন্ডারি স্ট্রাকচারাল এলাকায় ডিজাইন প্রাইমারগুলি যতটা সম্ভব এড়ানো উচিত।
- আপস্ট্রিম এবং ডাউনস্ট্রিম প্রাইমারের 3′ প্রান্তের মধ্যে 2 বা তার বেশি পরিপূরক ঘাঁটি তৈরি করা এড়িয়ে চলুন।
- প্রাইমার 3′ টার্মিনাল বেস 3টি অতিরিক্ত পরপর G বা C সহ উপস্থিত থাকতে পারে না।
- প্রাইমারগুলিতে পরিপূরক কাঠামো থাকতে পারে না, অন্যথায় একটি হেয়ারপিন গঠন তৈরি হবে, যা পিসিআর পরিবর্ধনকে প্রভাবিত করবে।
- ATCG প্রাইমার সিকোয়েন্সে যতটা সম্ভব সমানভাবে বিতরণ করা উচিত এবং 3′ টার্মিনাল বেস টি হিসাবে এড়ানো উচিত।
পরিশিষ্ট1: সেইল ডাইরেক্টRT-qPCR কিট উপাদানটি সম্পূরক প্যাক
1. সেল লাইসিস সমাধান
| সেল লাইসিস সমাধান | |||
| কিট উপাদান (24-ওয়েল লাইসিস সিস্টেম / ওয়েল) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 টি | 500 টি | ||
| অংশআমি | বাফার CL | 20 মিলি | 100 মিলি |
| ফোরজিন প্রোটিজ প্লাস II | 400 μl | 1 মিলি × 2 | |
| বাফার ST | 1 মিলি × 2 | 10 মিলি | |
| অংশ২ | ডিএনএ ইরেজার | 400 μl | 1 মিলি × 2 |
| আরটি মিক্স | |
| কিট উপাদান (20 μl প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | DRT-01011-B1 |
| 200 টি | |
| 5× ডাইরেক্ট আরটি মিক্স | 800 μl |
| RNase-মুক্ত ddH2O | 1.7 মিলি × 2 |
| qPCR মিক্স | ||
| কিট উপাদান (20 μl প্রতিক্রিয়া সিস্টেম) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 টি | 1000 টি | |
| 2× ডাইরেক্ট qPCR মিক্স-তাকমান | 1 মিলি × 2 | 1.7 মিলি × 6 |
| 20× ROX রেফারেন্স ডাই | 40 μl | 200 μl |
| RNase-মুক্ত ddH2O | 1.7 মিলি | 10 মিলি |
নির্দেশিকা ম্যানুয়াল:
