কোনো পরিবর্ধন সংকেত নেই

1. কিটটিতে থাকা Taq DNA পলিমারেজ অনুপযুক্ত স্টোরেজ বা কিটের মেয়াদ শেষ হওয়ার কারণে তার কার্যকলাপ হারায়।
সুপারিশ: কিট স্টোরেজ শর্তাবলী নিশ্চিত করুন;পিসিআর সিস্টেমে যথাযথ পরিমাণে তাক ডিএনএ পলিমারেজ পুনরায় যোগ করুন বা সম্পর্কিত পরীক্ষার জন্য একটি নতুন রিয়েল টাইম পিসিআর কিট কিনুন।

2. ডিএনএ টেমপ্লেটে তাক ডিএনএ পলিমারেজের প্রচুর ইনহিবিটর রয়েছে।
পরামর্শ: টেমপ্লেটটি পুনরুদ্ধার করুন বা ব্যবহৃত টেমপ্লেটের পরিমাণ কমিয়ে দিন।

3. Mg2+ ঘনত্ব উপযুক্ত নয়।
সুপারিশ: আমরা যে 2× রিয়েল পিসিআর মিক্স প্রদান করি তার Mg2+ ঘনত্ব হল 3.5mM।যাইহোক, কিছু বিশেষ প্রাইমার এবং টেমপ্লেটের জন্য, Mg2+ ঘনত্ব বেশি হতে পারে।অতএব, আপনি Mg2+ ঘনত্ব অপ্টিমাইজ করতে সরাসরি MgCl2 যোগ করতে পারেন।প্রতিবার অপ্টিমাইজেশানের জন্য Mg2+ 0.5mM বাড়াতে সুপারিশ করা হয়।

4. পিসিআর পরিবর্ধন শর্ত উপযুক্ত নয়, এবং প্রাইমার ক্রম বা ঘনত্ব অনুপযুক্ত।
পরামর্শ: প্রাইমার সিকোয়েন্সের সঠিকতা নিশ্চিত করুন এবং প্রাইমারটি অবনমিত হয়নি;যদি পরিবর্ধন সংকেত ভাল না হয়, অ্যানিলিং তাপমাত্রা কম করার চেষ্টা করুন এবং প্রাইমারের ঘনত্ব যথাযথভাবে সামঞ্জস্য করুন।

5. টেমপ্লেটের পরিমাণ খুব কম বা খুব বেশি।
সুপারিশ: টেমপ্লেট লিনিয়ারাইজেশন গ্রেডিয়েন্ট ডিলিউশন সম্পাদন করুন এবং রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষার জন্য সেরা পিসিআর প্রভাব সহ টেমপ্লেট ঘনত্ব নির্বাচন করুন।

NTC-এর খুব বেশি ফ্লুরোসেন্স মান রয়েছে

1. রিএজেন্ট দূষণ অপারেশন সময় সৃষ্ট.
সুপারিশ: রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষার জন্য নতুন রিএজেন্ট দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

2. পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের প্রস্তুতির সময় দূষণ ঘটেছে।
সুপারিশ: অপারেশন চলাকালীন প্রয়োজনীয় প্রতিরক্ষামূলক ব্যবস্থা নিন, যেমন: ল্যাটেক্স গ্লাভস পরা, ফিল্টার সহ পিপেটের ডগা ব্যবহার করা ইত্যাদি।

3. প্রাইমারগুলি ক্ষয়প্রাপ্ত হয় এবং প্রাইমারগুলির অবক্ষয় অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধনের কারণ হবে৷
পরামর্শ: প্রাইমারগুলি অবনমিত হয়েছে কিনা তা সনাক্ত করতে SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করুন এবং রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষার জন্য নতুন প্রাইমার দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

প্রাইমার ডাইমার বা অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন

1. Mg2+ ঘনত্ব উপযুক্ত নয়।
প্রস্তাবনা: আমরা যে 2× রিয়েল পিসিআর ইজিটিএম মিক্স সরবরাহ করি তার Mg2+ ঘনত্ব হল 3.5 মিমি।যাইহোক, কিছু বিশেষ প্রাইমার এবং টেমপ্লেটের জন্য, Mg2+ ঘনত্ব বেশি হতে পারে।অতএব, আপনি Mg2+ ঘনত্ব অপ্টিমাইজ করতে সরাসরি MgCl2 যোগ করতে পারেন।প্রতিবার অপ্টিমাইজেশানের জন্য Mg2+ 0.5mM বাড়াতে সুপারিশ করা হয়।

2. পিসিআর অ্যানিলিং তাপমাত্রা খুব কম।
পরামর্শ: প্রতিবার পিসিআর অ্যানিলিং তাপমাত্রা 1℃ বা 2℃ বৃদ্ধি করুন।

3. পিসিআর পণ্যটি খুব দীর্ঘ।
সুপারিশ: রিয়েল টাইম পিসিআর পণ্যের দৈর্ঘ্য 100-150bp-এর মধ্যে হওয়া উচিত, 500bp-এর বেশি নয়।

4. প্রাইমারগুলি ক্ষয়প্রাপ্ত হয় এবং প্রাইমারগুলির অবক্ষয় নির্দিষ্ট পরিবর্ধনের চেহারার দিকে নিয়ে যায়।
পরামর্শ: প্রাইমারগুলি অবনমিত হয়েছে কিনা তা সনাক্ত করতে SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করুন এবং রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষার জন্য নতুন প্রাইমার দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

5. পিসিআর সিস্টেমটি অনুপযুক্ত, বা সিস্টেমটি খুব ছোট।
পরামর্শ: পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি খুব ছোট হওয়ায় সনাক্তকরণের সঠিকতা হ্রাস পাবে।রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষা পুনরায় চালানোর জন্য পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্র দ্বারা সুপারিশকৃত প্রতিক্রিয়া সিস্টেম ব্যবহার করা ভাল।

পরিমাণগত মানের দুর্বল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা

1. যন্ত্রটি ত্রুটিপূর্ণ।
পরামর্শ: যন্ত্রের প্রতিটি পিসিআর ছিদ্রের মধ্যে ত্রুটি থাকতে পারে, যার ফলে তাপমাত্রা ব্যবস্থাপনা বা সনাক্তকরণের সময় দুর্বল প্রজননযোগ্যতা হয়।অনুগ্রহ করে সংশ্লিষ্ট যন্ত্রের নির্দেশাবলী অনুযায়ী চেক করুন।

2. নমুনা বিশুদ্ধতা ভাল নয়.
প্রস্তাবনা: অশুদ্ধ নমুনাগুলি পরীক্ষার দুর্বল প্রজননযোগ্যতার দিকে পরিচালিত করবে, যার মধ্যে টেমপ্লেট এবং প্রাইমারগুলির বিশুদ্ধতা অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।টেমপ্লেটটি পুনরায় পরিশোধন করা সর্বোত্তম, এবং প্রাইমারগুলি SDS-PAGE দ্বারা সর্বোত্তম বিশুদ্ধ করা হয়।

3. পিসিআর সিস্টেম প্রস্তুতি এবং স্টোরেজ সময় খুব দীর্ঘ.
পরামর্শ: প্রস্তুতির পরপরই পিসিআর পরীক্ষার জন্য রিয়েল টাইম পিসিআর সিস্টেম ব্যবহার করুন এবং এটিকে খুব বেশি দিন রেখে দেবেন না।

4. পিসিআর পরিবর্ধন শর্ত উপযুক্ত নয়, এবং প্রাইমার ক্রম বা ঘনত্ব অনুপযুক্ত।
পরামর্শ: প্রাইমার সিকোয়েন্সের সঠিকতা নিশ্চিত করুন এবং প্রাইমারটি অবনমিত হয়নি;যদি পরিবর্ধন সংকেত ভাল না হয়, অ্যানিলিং তাপমাত্রা কম করার চেষ্টা করুন এবং প্রাইমারের ঘনত্ব যথাযথভাবে সামঞ্জস্য করুন।

5. পিসিআর সিস্টেমটি অনুপযুক্ত, বা সিস্টেমটি খুব ছোট।
পরামর্শ: পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি খুব ছোট হওয়ায় সনাক্তকরণের সঠিকতা হ্রাস পাবে।রিয়েল টাইম পিসিআর পরীক্ষা পুনরায় চালানোর জন্য পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্র দ্বারা সুপারিশকৃত প্রতিক্রিয়া সিস্টেম ব্যবহার করা ভাল।