RNase একটি সংবেদনশীল শব্দ যা অনেক ছাত্র যারা প্রায়ই RNA নিষ্কাশন পরীক্ষা পরিচালনা করে তারা শুনতে চায় না।সম্পূর্ণরূপে সজ্জিত, RNA যেটি শেষ পর্যন্ত অত্যন্ত বিষাক্ত বিকারক ফেনল এবং ক্লোরোফর্ম দিয়ে নিষ্কাশন করা হয়েছিল তা ক্ষয়প্রাপ্ত হয়েছিল।আমি মিটমাট করছি না!!!আজ, চলুন এক নজরে দেখে নেওয়া যাক বিখ্যাত Rnase এর উৎপত্তি।

Ribonuclease (RNase), বা RNase, একটি নিউক্লিজ যা RNA কে ছোট অণুতে হাইড্রোলাইজ করতে পারে।RNase, একটি ছোট অণু প্রোটিন হিসাবে, অস্বাভাবিকভাবে স্থিতিশীল .প্রচলিত উচ্চ তাপমাত্রা এবং উচ্চ চাপ বাষ্প নির্বীজন এবং প্রোটিন ইনহিবিটর এটি সম্পূর্ণরূপে নিষ্ক্রিয় করতে পারে না।RNase এর স্থায়িত্ব প্রধানত কাঠামোর মধ্যে ডাইসালফাইড বন্ড থেকে আসে।উদাহরণস্বরূপ, বোভাইন প্যানক্রিয়াসের সাধারণত ব্যবহৃত RNase-এ মাত্র 124টি অ্যামিনো অ্যাসিড থাকে, কিন্তু এতে 4টি ডিসালফাইড বন্ধন থাকে।সালফার বন্ড এবং ডিসালফাইড বন্ড চমৎকার তাপীয় স্থিতিশীলতার সাথে RNase এন্ডো করে।উপরন্তু, rnase এর তুলনামূলকভাবে ছোট আণবিক ওজন রয়েছে এবং অনেক ক্ষেত্রে দ্রুত তার আসল রূপ পুনরুদ্ধার করতে পারে।

অত্যন্ত স্থিতিশীল হওয়ার পাশাপাশি,RNase পরীক্ষাগারে সর্বব্যাপী .RNase একটি জৈবিক প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা।একটি কোষের জন্য, বহিরাগত আরএনএ প্রায়ই মারাত্মক।এক্সোজেনাস ডিএনএর সাথে তুলনা করে, এক্সোজেনাস আরএনএ প্রায়শই বেশি বিপজ্জনক।RNA আনন্দের সাথে প্রতিলিপি করা এবং অনুবাদ করা হয়েছে, তাই প্রায় সমস্ত জীবই বহিরাগত RNA আক্রমণের বিরুদ্ধে রক্ষা করার জন্য RNase-এর বিকাশ করেছে।অতএব, ল্যাবরেটরিতে চাষ করা ব্যাকটেরিয়া কোষ এবং আপনি যারা আরএনএ নিষ্কাশন করেন তারা RNase এর সুগন্ধ নির্গত করেন।মানবদেহের তরল (লালা, অশ্রু, ইত্যাদি) প্রচুর পরিমাণে RNase ধারণ করে, তাই RNA ক্ষয় হলে কাঁদবেন না।আপনি যত বেশি কাঁদবেন, ততই খারাপ আরএনএ অবক্ষয়!!বোন দাইউ আরএনএ নিষ্কাশনের জন্য উপযুক্ত নয়!

এছাড়াও, আপনার সূক্ষ্ম ত্বকেও প্রচুর পরিমাণে RNase রয়েছে এবং মার্কার, পাইপেট, রেফ্রিজারেটরের দরজা এবং দরজার হাতল যা ত্বক দ্বারা স্পর্শ করা হয়েছে তাতেও RNase রয়েছে।

এত ঘোরাঘুরির সাথে, আসুন RNases এর সাথে কীভাবে মোকাবিলা করতে হয় তা একবার দেখে নেওয়া যাক।

আরএনএ অপসারণ করার সময় প্রথম যে জিনিসটি সবাই চিন্তা করেডিইপিসি(ডাইথাইল পাইরোকার্বনেট)।DEPC প্রধানত RNase সক্রিয় গ্রুপ হিস্টিডিনের ইমিডাজল রিং এর সাথে একত্রিত করে প্রোটিনকে বিকৃত করে, যার ফলে এনজাইমের কার্যকলাপকে বাধা দেয়।0.1% DEPC Rnase-এ একটি ভাল অপসারণ প্রভাব ফেলতে পারে, তবে আমাদের মনোযোগ দিতে হবে যে DEPC একটি পরিচিত কার্সিনোজেন, তাই এটি ব্যবহার করার সময় বিশেষ মনোযোগ দেওয়া উচিত।

RNase এর জন্য, আমাদের দুটি দিক থেকে শুরু করতে হবে,প্রথমটি হল অন্তঃসত্ত্বা RNase-এর কার্যকলাপকে বাধা দেওয়া

প্রচলিত আরএনএ নিষ্কাশন বিকারক যেমন ট্রাইজলে থাকা গুয়ানিডিন আইসোথিওসায়ানেট এবং ডিটিটি RNase এর ডিসালফাইড বন্ধন খুলতে পারে, তবে এখনও কিছু RNase আছে, বিশেষ করে টিস্যু নমুনায়, তাই কম তাপমাত্রার দিকে মনোযোগ দিন।

1.টিস্যুর নমুনা বের করার পর তা তরল নাইট্রোজেনে বা বাণিজ্যিক RNA সংরক্ষণ দ্রবণে নিমজ্জিত করুন।

2.কোষের নমুনার আরএনএ বের করার পর, এটি লাইসিস দ্রবণে যোগ করুন এবং বরফের বাক্সে লাইস করুন।

3. গ্রাইন্ডিংয়ের জন্য তরল নাইট্রোজেন ব্যবহার করা ভাল যখন টিস্যু নমুনা একজাত করা হয়।তরল নাইট্রোজেন ছাড়া বৈদ্যুতিক হোমোজেনাইজার ব্যবহার করার সময়, হোমোজেনেট অ্যাডাপ্টারটিকে সম্পূর্ণরূপে প্রি-কুলিংয়ের দিকে মনোযোগ দিন।

দ্বিতীয়টি হল এক্সোজেনাস ডিনেস

1.সম্পূর্ণরূপে সশস্ত্র হোন, একটি ল্যাব কোট পরুন, একটি মুখোশ পরুন এবং একজোড়া নতুন গ্লাভস পরতে ভুলবেন না (এত মিতব্যয়ী হবেন না! এটি লক্ষ করা উচিত যে ট্রিজল অত্যন্ত ক্ষয়কারী, এবং এটি গ্লাভসের মাধ্যমেও খুব শক্তিশালী, তাই আপনার হাতে ফোঁটাবেন না)।

2.সমস্ত ব্যবহৃত পাইপেটের টিপস, ইপি টিউব, পিসিআর টিউব এবং অন্যান্য সরঞ্জামগুলি অবশ্যই ডি-আরএনসে চিকিত্সা করা উচিত।এটি 0.1% ডিইপিসিতে ভিজিয়ে তারপর উচ্চ চাপে চাপ দেওয়া যেতে পারে।একটি ফিউম ফণা মধ্যে অপারেশন মনোযোগ দিন।স্থানীয় অত্যাচারীরা এনজাইম অপসারণের জন্য সরাসরি ভোগ্যপণ্য কিনতে পারে।

PS: আমি আপনাকে একটি অলস পদ্ধতি বলি।যদিও উচ্চ তাপমাত্রা এবং উচ্চ চাপ RNase সম্পূর্ণরূপে অপসারণ করতে পারে না, এটি এটির একটি বড় অংশকে সরিয়ে দেবে।উচ্চ তাপমাত্রা এবং উচ্চ চাপ 2 বার একটি ভাল প্রভাব আছে, এবং RNA নিষ্কাশন সামান্য প্রভাব আছে.

3.অ্যালকোহল প্রোটিন বিকৃত করতে পারে,তাই RNA নিষ্কাশন টেবিল 75% অ্যালকোহল দিয়ে মুছে ফেলা যেতে পারে , এবং গ্লাভস এছাড়াও অ্যালকোহল সঙ্গে স্প্রে করা যেতে পারে.

4.চূড়ান্ত RNA দ্রবীভূত দ্রবণ এবং সেন্ট্রিফিউজ টিউবও ডি-RNase চিকিত্সা করা উচিত।DEPC জল হল একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত RNA দ্রবীভূত দ্রবণ।আসুন DEPC জলের সঠিক প্রস্তুতির পদ্ধতি সম্পর্কে কথা বলি (আপনি এটি কেনার সময় বাণিজ্যিক DEPC পুনরায় প্যাকেজ করতে ভুলবেন না)

1:1000-এ অতি বিশুদ্ধ জলে DEPC যোগ করুন, ভালভাবে ঝাঁকান, 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সারারাত দাঁড়াতে দিন এবং 121 ডিগ্রি সেলসিয়াসে উচ্চ তাপমাত্রা এবং উচ্চ চাপে 15 মিনিটের জন্য জীবাণুমুক্ত করুন।DEPC জল 1 মিলি অ্যালিকোট-এ -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

পরিশেষে, সংক্ষেপে বলা যায়: নিম্ন তাপমাত্রাই মূল বিষয়, ভোগ্যপণ্য ভালোভাবে পরিচালনা করা হয়, সম্পূর্ণ সশস্ত্র এবং কম কথা বলা যায়!

আচ্ছা, আজকের কৌশলের জন্য এটাই।আমি আপনার উল্লেখ করা সমস্ত RNA ঘনত্ব এবং বিশুদ্ধতা কামনা করছি।A260/A280 উভয়ই 2.0!!!

অবশ্যই, আপনি যদি একটি ব্যবহার করেনকক্ষ তাপমাত্রা অপারেশন RNA নিষ্কাশন কিট, আপনি উপরের সমস্যা সম্মুখীন নাও হতে পারে.

ঘরের তাপমাত্রায় অপারেশন, DNase যোগ না করে, 11 মিনিটে কোষ থেকে মোট RNA বের করে এবং 30 মিনিটে প্রাণীর টিস্যু বা উদ্ভিদ থেকে মোট RNA বের করে।

ট্রায়াল নমুনা জন্য, যোগাযোগ করুন:overseas@foregene.com

সংশ্লিষ্ট পণ্য:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/