আঠালো পুনরুদ্ধারের উন্নতির জন্য টিপস

1. ইলেক্ট্রোফোরেসিস সময় নমুনা লোড বৃদ্ধি.

2. সদ্য প্রস্তুত ইলেক্ট্রোফোরেসিস বাফার ব্যবহার করুন।

3. আঠা কাটার সময়, আঠালো কাটার ভলিউম কমাতে স্ট্রিপগুলি দিয়ে শুধুমাত্র আঠালো কাটার চেষ্টা করুন: কয়েকটি উদ্দেশ্যের টুকরো দিয়ে আঠার প্রয়োজন নেই, অন্যথায় এটি পুনরুদ্ধারের হারকে প্রভাবিত করবে।

4. দুই বা ততোধিক আঠা গলানোর পরে, ভলিউম যত বড়ই হোক না কেন একটি টিউব ব্যবহার করুন এবং একই কলামে স্থানান্তর করুন।

5. সোলে যোগ করা দ্রবণটি একটু বেশি হতে পারে, যা ঝিল্লির সাথে ডিএনএ বাঁধার জন্য আরও সহায়ক, তবে সাধারণত 750ul এর বেশি হয় না।

6. জেল পুনরুদ্ধারের চাবিকাঠি হল কলামে দ্রবণটির লবণের ঘনত্ব, অম্লতা (চার্জ) এবং হাইড্রোফোবিসিটির মাধ্যমে কলামের সাথে ডিএনএ আবদ্ধ করা।অতএব, যদি ইলেক্ট্রোফোরেসিস বাফারের pH খুব বেশি হয়, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) sol-এ যোগ করা যেতে পারে;ঝিল্লিতে ডিএনএ অণুগুলিকে আরও ভালভাবে আটকানোর জন্য, আঠা দ্রবীভূত করার পরে তরলে তাপে 30% আইসোপ্রোপ্যানল যোগ করা যেতে পারে।

7. ইলুয়েন্ট যোগ করার আগে, ইথানলকে সম্পূর্ণরূপে বাষ্পীভূত করতে কয়েক মিনিট (প্রায় 10 মিনিট) কলামটি ঘরের তাপমাত্রায় রেখে দিন।

8. অবশেষে, পুনরুদ্ধারের ভলিউম কমাতে কম ইলুয়েন্ট যোগ করুন।সাধারণত, 30-50μl ইলুয়েন্ট ইলিউশনের জন্য ব্যবহার করা হয় (খুব কম নয়, অন্যথায় এটি ঝিল্লি ভেজাতে সক্ষম হবে না, যা ইলুশনের জন্য সহায়ক নয়);ইলুশন ফোঁটাগুলি ঝিল্লির কেন্দ্রে থাকে, যাতে ঝিল্লির সাথে আবদ্ধ ডিএনএ সম্পূর্ণরূপে নির্গত হয়।

9. ইলুয়েন্ট যোগ করার পরে, এটি 55 ডিগ্রি জলের স্নানে 5 মিনিটের জন্য নির্গত করা যেতে পারে বা 50 ডিগ্রি জলের স্নানে 10 মিনিটের বেশি সময় ধরে রাখা যেতে পারে, বা 4 ডিগ্রিতে একটি প্যারাফিল্ম দিয়ে রাতারাতি সিল করা যেতে পারে এবং তারপরে পরের দিন পুনরুদ্ধারের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা যেতে পারে, প্রভাবটি ভাল।

10. সেন্ট্রিফিউজ এলুয়েটকে শোষণ কলামে আবার যোগ করুন এবং আবার সেন্ট্রিফিউজ করুন।

PCR পণ্য পুনরুদ্ধারের জন্য বিস্তারিত পদ্ধতি এবং পদ্ধতি

1. সাধারণ রাবার পুনর্ব্যবহারযোগ্য

আপনি যদি আঠালো পুনরুদ্ধার করতে চান তবে একটি কিট ব্যবহার করা ভাল, যা সুবিধাজনক এবং পুনরুদ্ধারের হার কিছুটা বেশি।আপনি যদি সত্যিই এটিকে ম্যানুয়ালি পুনরুদ্ধার করতে চান, আপনি আঠা কাটার পরে TE এর ভলিউমের 3 গুণ যোগ করতে পারেন।জলের স্নানে গলে যাওয়ার পরে, ফেনল, ফেনল/ক্লোরোফর্ম পরিষ্কারভাবে নিষ্কাশন করা হয় এবং ইথানল অবক্ষয় করা হয়।এটাই.

2. কম গলনাঙ্কের জেল থেকে ডিএনএ পুনরুদ্ধার

ডিএনএ টুকরা পরিশোধন জেলের আয়তনের সমান TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) যোগ করুন এবং জেলটি সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত করার জন্য 5 মিনিটের জন্য একটি 65°C জলের স্নানে রাখুন।

এটি ঘরের তাপমাত্রায় আনার পরে, সমান পরিমাণে ফেনল (TE দিয়ে স্যাচুরেটেড, TE উপরের স্তরে সিল করা হয়েছিল, এবং ফেনলের নীচের স্তরটি সরানো হয়েছিল) যোগ করা হয়েছিল, এবং মিশ্রণটি আলতোভাবে মেশানো হয়েছিল (মিশ্রণের প্রয়োজন নেই), এবং 12,000 rpm-এ 3 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল।1-2 বার পুনরাবৃত্তি করুন।

সুপারনাট্যান্ট নিন, ইথানল বৃষ্টিপাতের জন্য 3mol/L সোডিয়াম অ্যাসিটেট (pH 5.2) এর 0.1 ভলিউম এবং পরম ইথানলের 2.5 গুণ ভলিউম যোগ করুন।উপযুক্ত পরিমাণে TE দিয়ে বিশুদ্ধ ডিএনএ দ্রবীভূত করুন, বিষয়বস্তু পরিমাপ করুন এবং ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত করুন (এটি লক্ষ্য জিনের গঠন বিশ্লেষণ, প্রোব প্রস্তুতি ইত্যাদির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে)।

3. ভাল পরিবর্ধন নির্দিষ্টতা সঙ্গে PCR পুনরুদ্ধার

যদি পিসিআর পরিবর্ধনের সুনির্দিষ্টতা ভাল হয় তবে এটি কেবলমাত্র পিসিআর পণ্যের একটি সাধারণ পরিশোধন এবং পুনরুদ্ধার।আপনি PCR পণ্যে 50ug/ml প্রোটিনেস K যোগ করতে পারেন, 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রী, একবার ফেনল/ক্লোরোফর্ম দিয়ে বের করতে পারেন, ক্লোরোফর্ম দিয়ে একবার বের করতে পারেন এবং সুপারনাট্যান্টের 0.1 ভলিউম যোগ করতে পারেন।2.5 ভলিউম পরম ইথানলের সাথে বৃষ্টিপাতের মাধ্যমে সোডিয়াম অ্যাসিটেট উদ্ধার করা হয়েছিল।

সংশ্লিষ্ট পণ্য:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/