সম্প্রতি, আমি আশ্চর্যজনক কিছু আবিষ্কার!তার আশেপাশে অনেক উন্নত পরীক্ষা-নিরীক্ষা পেশাদাররা এমনকি কিছু খুব প্রাথমিক পরীক্ষামূলক জ্ঞানের পয়েন্টও জানেন না।

উদাহরণস্বরূপ, আপনি নিম্নলিখিত প্রশ্নের উত্তর দিতে পারেন?

OD260 এবং A260 এর মধ্যে কোন পার্থক্য আছে কি?প্রতিটি মানে কি?
OD হল অপটিক্যাল ঘনত্বের সংক্ষিপ্ত রূপ (অপটিক্যাল ঘনত্ব), A হল শোষণের সংক্ষিপ্ত রূপ (শোষণ), দুটি ধারণা আসলে একই, "অপটিক্যাল ঘনত্ব" হল "শোষণ", কিন্তু "অপটিক্যাল ঘনত্ব" বেশিরভাগ জাতীয় মান এবং আরও মানসম্মত।

সাধারণত আমরা নিউক্লিক অ্যাসিড ঘনত্ব গণনা করতে 260nm-এ OD মান পরিমাপ করি, তাহলে 1OD কী প্রতিনিধিত্ব করে?
260nm তরঙ্গদৈর্ঘ্যে নিউক্লিক অ্যাসিডের সর্বাধিক শোষণের শিখর রয়েছে, যাতে ডিএনএ এবং আরএনএ উভয়ই রয়েছে, সেইসাথে খণ্ডিত নিউক্লিক অ্যাসিডের টুকরো (এটি হল মূল পয়েন্ট)।
260 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে পরিমাপ করা OD মান OD260 হিসাবে রেকর্ড করা হয়েছিল।যদি নমুনা খাঁটি হয়, OD260 মান নিউক্লিক অ্যাসিড নমুনার ঘনত্ব গণনা করতে পারে।
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ)
=37 μg/ml ssDNA (একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (অলিগোনিউক্লিওটাইডস)
আরটি-পিসিআর, রিয়েলটাইম-পিসিআর এবং কিউপিসিআর-এর মধ্যে কোন সংযোগ এবং পার্থক্য আছে কি?
রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পিসিআর-এর জন্য RT-PCR সংক্ষিপ্ত
রিয়েল টাইম PCR=qPCR, পরিমাণগত রিয়েল টাইম PCR-এর সংক্ষিপ্ত
যদিও রিয়েল টাইম পিসিআর (রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্ট কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর) এবং রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পিসিআর (রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পিসিআর) উভয়কেই সংক্ষেপে আরটি-পিসিআর বলে মনে হয়।কিন্তু আন্তর্জাতিক কনভেনশন হল: আরটি-পিসিআর বিশেষভাবে রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পিসিআরকে বোঝায়।

জীববিজ্ঞানে DNA/RNA এর দৈর্ঘ্য বর্ণনা করার জন্য সাধারণত ব্যবহৃত nt, bp এবং kb কি?
nt = নিউক্লিওটাইড
bp = বেস পেয়ার বেস পেয়ার
kb = কিলোবেস

অবশ্যই, আপনি বলবেন যে অনেকেই এই ছোট বিবরণগুলিকে গুরুত্ব দেন না!প্রত্যেকেই এটি করে, এবং কেউ আপনাকে জিজ্ঞাসা করবে না এটি কী।আপনি জানেন যে এটি অপ্রয়োজনীয়, তাই না?

না, না, না, এটা জানা খুব দরকার!কারণ যা?
কারণ আপনি একটি নিবন্ধ পোস্ট করতে চান!ভাই!আপনি স্নাতক বা বৈজ্ঞানিক গবেষণা অর্জনের জন্য লক্ষ্য রাখছেন না কেন, কথা বলার জন্য আপনাকে অবশ্যই নিবন্ধগুলির উপর নির্ভর করতে হবে!

নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন সবচেয়ে সহজ এবং সবচেয়ে মৌলিক পরীক্ষা হওয়া উচিত।নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের গুণমান সরাসরি পরবর্তী পরীক্ষার ফলাফল নির্ধারণ করে।

যদিও আমি অনেকবার বলেছি, তবুও অনেক বন্ধু আছে যারা পাত্তা দেয় না।এইবার আমি নিবন্ধ থেকে সরে যাওয়ার সিদ্ধান্ত নিয়েছি!

পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর পরীক্ষা-নিরীক্ষা প্রকাশের জন্য ন্যূনতম তথ্য, যাকে MIQE হিসাবে উল্লেখ করা হয়, হল আন্তর্জাতিকভাবে চালু করা ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পরীক্ষার নির্দেশিকাগুলির একটি সেট, যা ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর পরীক্ষা মূল্যায়ন এবং নিবন্ধ প্রকাশের জন্য প্রয়োজনীয় পরীক্ষামূলক তথ্যের জন্য ন্যূনতম মান প্রস্তাব করে।পরীক্ষক দ্বারা প্রদত্ত পরীক্ষামূলক অবস্থা এবং বিশ্লেষণ পদ্ধতির মাধ্যমে, পর্যালোচকরা গবেষকের পরীক্ষামূলক প্রকল্পের বৈধতা আরও ভালভাবে মূল্যায়ন করতে পারেন।

এটি দেখা যায় যে নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের বিভাগে, নিম্নলিখিত সনাক্তকরণ আইটেমগুলি প্রস্তাব করা হয়েছে,

"E" এমন তথ্য নির্দেশ করে যা অবশ্যই প্রদান করতে হবে এবং "D" নির্দেশ করে যে তথ্য প্রয়োজন হলে প্রদান করা উচিত।

ফর্ম খুব জটিল, আসলে, আমি বলতে চাই যে সবার থেকে শুরু করা দরকার

বিশুদ্ধতা (D), ফলন (D), অখণ্ডতা (E) এবং ধারাবাহিকতা (E) এই চারটি দিকের নিউক্লিক অ্যাসিড মূল্যায়ন করতে।

পরীক্ষামূলক অভ্যাস অনুসারে, প্রথমে বিশুদ্ধতা এবং একাগ্রতার মূল্যায়ন পদ্ধতি সম্পর্কে কথা বলুন।

OD পরিমাপ পরীক্ষাকারীদের জন্য প্রিয় এবং সবচেয়ে সহজ সনাক্তকরণ পদ্ধতি।নীতির জন্য, আমি এখানে বিশদে যাব না।অনেক পরীক্ষাগার এখন আল্ট্রা-মাইক্রো স্পেকট্রোফোটোমিটার ব্যবহার করে সরাসরি পরিমাণগতভাবে নিউক্লিক অ্যাসিডের নমুনা বিশ্লেষণ করতে।শোষণের মান প্রদর্শন করার সময়, প্রোগ্রামটি সরাসরি ঘনত্বের মান (নিউক্লিক অ্যাসিড, প্রোটিন এবং ফ্লুরোসেন্ট ডাই) এবং সম্পর্কিত অনুপাত দেয়।OD মান বিশ্লেষণের জন্য, এই ছবিটি সংরক্ষণ করুন এবং আপনি ঠিক হয়ে যাবেন।

ইউনিভার্সাল OD মান সমাধান তালিকা

যাইহোক, কিছু সতর্কতা রয়েছে যা আপনার জন্য আলাদাভাবে আনা দরকার।

(সর্বশেষে, আমি জানি যে আপনি অবশ্যই সেই ব্যক্তি হবেন যারা সঞ্চয় করেন এবং আপনার প্রয়োজন না হওয়া পর্যন্ত অপেক্ষা করেন!)

নোট 1 সরঞ্জাম

OD মান বিভিন্ন সরঞ্জাম দ্বারা প্রভাবিত হবে।যতক্ষণ OD260 একটি নির্দিষ্ট সীমার মধ্যে থাকে, ততক্ষণ OD230 এবং OD280-এর মানগুলি অর্থবহ৷উদাহরণস্বরূপ, 260nm-এ সাধারণ Eppendorf D30-এর শোষণের পরিসর হল 0~3A, এবং থার্মোর NanoDrop One হল 260nm-এ৷শোষণের পরিসীমা 0.5~62.5A।

নোট 2পাতলা বিকারক

OD মান বিভিন্ন রিএজেন্টের তরলীকরণ দ্বারা প্রভাবিত হতে পারে।উদাহরণস্বরূপ, pH এ বিশুদ্ধ RNA এর OD260/280 রিডিং7.5 10 মিমি ট্রিসবাফার 1.9-2.1 এর মধ্যে, যখননিরপেক্ষ জলীয় দ্রবণঅনুপাত কম হবে, হয়তো শুধুমাত্র 1.8-2.0, কিন্তু এর মানে এই নয় যে RNA-এর মানের পার্থক্য পরিবর্তন হয়।

নোট 3অবশিষ্ট পদার্থ

অবশিষ্ট পদার্থের অস্তিত্ব নিউক্লিক অ্যাসিড ঘনত্ব পরিমাপের নির্ভুলতাকে প্রভাবিত করবে, তাই যতটা সম্ভব নিউক্লিক অ্যাসিড নমুনাগুলিতে প্রোটিন, ফেনল, পলিস্যাকারাইড এবং পলিফেনলের অবশিষ্টাংশগুলি এড়ানো প্রয়োজন।

যাইহোক, আসলে, জৈব বিকারক সঙ্গে নিষ্কাশন একটি পুরানো পদ্ধতি.বাণিজ্যিক কিটগুলিতে, নিষ্কাশন প্রভাব সেন্ট্রিফিউগেশনের সাথে মিলিত একটি সিলিকা-ভিত্তিক শোষণ কলামের মাধ্যমে অর্জন করা যেতে পারে, বিষাক্ত এবং ক্ষতিকারক জৈব বিকারকগুলি এড়ানো যা অপসারণ করা কঠিন, ইত্যাদি সমস্যা, যেমনফোরজিনের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন কিট, পুরো অপারেশন জুড়ে DNase/RNase এবং বিষাক্ত জৈব বিকারক ব্যবহার করে না, দ্রুত এবং নিরাপদ, এবংপ্রভাব হয়ভাল(দুর্ঘটনাক্রমে বলেছিল যে এটি টাক ছিল, তবে আমি জানি আপনি জানতে চান)।

উদাহরণ 1: জিনোমিক ডিএনএ নিষ্কাশন ফলন এবং বিশুদ্ধতা

ফোরজিন সয়েল ডিএনএ আইসোলেশন কিট (DE-05511) বিভিন্ন উত্স থেকে মাটির নমুনাগুলিকে চিকিত্সা করে এবং প্রাপ্ত জিনোমিক ডিএনএর পরিমাণ এবং বিশুদ্ধতা নিম্নলিখিত সারণীতে দেখানো হয়েছে:
উদাহরণ 2: টিস্যু আরএনএ নিষ্কাশন ফলন এবং বিশুদ্ধতা

অ্যানিমেল টোটাল আরএনএ আইসোলেশন কিট (RE-03012) বিভিন্ন টিস্যুর নমুনা প্রক্রিয়াজাত করে, এবং প্রাপ্ত আরএনএর পরিমাণ এবং বিশুদ্ধতা নীচের টেবিলে দেখানো হয়েছে (মাউস টিস্যুর জন্য):
যাইহোক, মনে করবেন না যে আপনি OD মান দিয়ে সম্পন্ন করেছেন।আমি আপনার জন্য সামনে যে মূল পয়েন্টগুলি আঁকলাম সেগুলির যত্ন নেওয়া কি আপনার আছে?

লক্ষ্য করুন

খণ্ডিত নিউক্লিক অ্যাসিড অণুগুলিও শোষণে গণনা করা হবে।ধরে নিচ্ছি যে আপনার আরএনএ-তে জিনোমিক ডিএনএ অবশিষ্টাংশ রয়েছে, আপনার OD মান খুব বেশি বলে মনে হবে, তবে আরএনএর প্রকৃত ঘনত্ব নির্ধারণ করা যাবে না।আপনার আরএনএ আছে কিনা তা অবক্ষয় আছে কিনা তা পরিষ্কার নয়, তাই আরও সঠিক রায় দেওয়ার জন্য আমাদের এখনও একটি ব্যাপক মূল্যায়ন পদ্ধতির প্রয়োজন, অর্থাৎ, MIQE-তে উল্লিখিত নিউক্লিক অ্যাসিড অখণ্ডতা মূল্যায়ন।