ডাইরেক্ট পিসিআর হল একটি প্রতিক্রিয়া যা নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন ছাড়াই প্রসারণের জন্য প্রাণী বা উদ্ভিদের টিস্যু সরাসরি ব্যবহার করে।অনেক উপায়ে, সরাসরি PCR নিয়মিত PCR এর মত কাজ করে

প্রধান পার্থক্য হল সরাসরি পিসিআর-এ ব্যবহৃত কাস্টম বাফার, নমুনাটি নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন ছাড়াই সরাসরি পিসিআর প্রতিক্রিয়ার শিকার হতে পারে, তবে এনজাইমগুলির সহনশীলতা এবং সরাসরি পিসিআর প্রতিক্রিয়াতে জড়িত বাফারের সামঞ্জস্যের জন্য সংশ্লিষ্ট প্রয়োজনীয়তা রয়েছে।

যদিও সাধারণ নমুনাগুলিতে কমবেশি পিসিআর ইনহিবিটর রয়েছে, তবে সরাসরি পিসিআর এখনও এনজাইম এবং বাফারগুলির ক্রিয়ায় নির্ভরযোগ্য পরিবর্ধন অর্জন করতে পারে।প্রথাগত পিসিআর প্রতিক্রিয়ার জন্য একটি টেমপ্লেট হিসাবে উচ্চ-মানের নিউক্লিক অ্যাসিড প্রয়োজন, যা টেমপ্লেটে প্রোটিন এবং অন্যান্য অমেধ্য থাকলে পিসিআর প্রতিক্রিয়ার মসৃণ অগ্রগতিকে বাধা দিতে পারে।ডাইরেক্ট পিসিআর বর্তমানে আণবিক ডায়াগনস্টিকসের ক্ষেত্রে অন্যতম জনপ্রিয় প্রযুক্তি।

01 ডাইরেক্ট পিসিআর মূলত প্রাণী এবং উদ্ভিদের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল

সরাসরি পিসিআর-এর প্রথম প্রয়োগ হল প্রাণী ও উদ্ভিদের ক্ষেত্রে, যেমন ইঁদুরের রক্ত, টিস্যু এবং চুল, বিড়াল, মুরগি, খরগোশ, ভেড়া, গবাদি পশু, ইত্যাদি, উদ্ভিদের পাতা এবং বীজ ইত্যাদি, জিনোটাইপিং, ট্রান্সজেনিক, প্লাজমিড সনাক্তকরণ, জিন নকআউট শনাক্তকরণ, এসএনএ শনাক্তকরণ ক্ষেত্র বিশ্লেষণ, এসএনএ শনাক্তকরণ, অন্যান্য ক্ষেত্র বিশ্লেষণ। s

এই ক্ষেত্রগুলির কিছু সাধারণ বৈশিষ্ট্য রয়েছে, অর্থাৎ, লক্ষ্য জিনের পরিমাণ তুলনামূলকভাবে বেশি এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন ঝামেলাপূর্ণ, তাই সরাসরি পিসিআর শুধুমাত্র সময় বাঁচাতে পারে না এবং ফলাফলের উপর সামান্য প্রভাব ফেলতে পারে না, কিন্তু খরচও বাঁচাতে পারে।

প্যাথোজেন সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত ডাইরেক্ট পিসিআর সাম্প্রতিক বছরগুলির বিষয়, কিছু পিসিআর রিএজেন্ট নির্মাতারা উদ্ভাবন করার সময় এই দিকে অনেক প্রচেষ্টা করেছেন।বিশেষ করে এই COVID-19 মহামারীতে, এই ধরনের অনেক শনাক্তকরণ পণ্য বাজারে এসেছে, যেমন SARS-CoV-2 নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ কিট (মাল্টিপ্লেক্স পিসিআর ফ্লুরোসেন্ট প্রোব মেথড) ফোরজিন দ্বারা গবেষণা করা এবং তৈরি করা হয়েছে, যা মানবিক অ্যাসিড সনাক্তকরণের জন্য রিয়েল-টাইম আরটি পিসিআর প্রযুক্তি (আরআরটি-পিসিআর) ব্যবহার করে গুণগত অ্যাসিড সনাক্তকরণের জন্য। অরোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব নমুনা।

ফোরজিন হল সাধারণ ORF1ab, N, E, এবং সনাক্তকরণের জন্য সরাসরি PCR প্রযুক্তি ব্যবহার করে এমন একটি কোম্পানি।বৈকল্পিক SARS-CoV-2 B.1.1.7 বংশ (UK), B.1.351 বংশ (ZA), B.1.617 বংশ (IND) এবং P.1 বংশ (BR) এর মতো মানব ন্যাসোফ্যারিঞ্জিয়াল বা অরোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব নমুনায় নিউক্লিক অ্যাসিডের বংশ।

02  সরাসরি পিসিআরের জন্য রিএজেন্ট প্রয়োজন

নমুনা লাইসেট

নমুনা lysate নিজের দ্বারা কনফিগার করা বা ক্রয় করা যেতে পারে।বিভিন্ন ব্র্যান্ডের লাইসেটের সংমিশ্রণে পার্থক্য লাইসিং ক্ষমতাকে আলাদা করে তুলবে এবং তারপরে লাইসিংয়ের সময় কিছুটা আলাদা হবে।উদাহরণস্বরূপ, প্রাণীর টিস্যুর নমুনা তৈরির জন্য, সাধারণত 30 মিনিট বা রাতারাতি লাইসিস সুপারিশ করা হয় এবং ভাইরাসগুলির জন্য 3-10 মিনিটের মধ্যে লাইসিস দ্রবণ করা হয়।

পিসিআর মাস্টার মিক্স

নির্দিষ্ট পরিবর্ধন এবং পরিবর্ধন ক্ষমতা বাড়ানোর জন্য হট-স্টার্ট ডিএনএ পলিমারেজ ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।প্রত্যক্ষ পিসিআর এর মূল একটি অত্যন্ত সহনশীল পলিমারেজ।

ডিএনএ পরিবর্ধনকে প্রভাবিত করে এমন নমুনার উপাদানগুলি বাদ বা বাধা দেয়

নমুনাটি লাইসেট দিয়ে প্রক্রিয়া করার পরে, প্রোটিন, লিপিড এবং অন্যান্য কোষের ধ্বংসাবশেষ মুক্তি পাবে, এই পদার্থগুলি পিসিআর প্রতিক্রিয়াকে বাধা দেবে।অতএব, সরাসরি পিসিআর-এর জন্য এই কারণগুলির প্রভাব কমাতে সংশ্লিষ্ট অপসারণ বা ইনহিবিটর যুক্ত করা প্রয়োজন।

03  সরাসরি পিসিআর-এর পাঁচটি জ্ঞান পয়েন্টের একটি সংগ্রহ

প্রথমত, ডাইরেক্ট পিসিআর প্রযুক্তি হল বিভিন্ন জৈবিক নমুনার জন্য সরাসরি পিসিআর প্রযুক্তি।এই প্রযুক্তিগত অবস্থার অধীনে, নিউক্লিক অ্যাসিডকে আলাদা করার এবং নিষ্কাশন করার প্রয়োজন নেই, সরাসরি টিস্যুর নমুনাটিকে বস্তু হিসাবে ব্যবহার করতে হবে এবং পিসিআর প্রতিক্রিয়া সম্পাদনের জন্য টার্গেট জিন প্রাইমার যোগ করতে হবে।

দ্বিতীয়ত, ডাইরেক্ট পিসিআর প্রযুক্তি শুধুমাত্র একটি ঐতিহ্যবাহী ডিএনএ টেমপ্লেট পরিবর্ধন প্রযুক্তি নয়, এতে আরএনএ টেমপ্লেট রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন পিসিআরও রয়েছে।

তৃতীয়ত, ডাইরেক্ট পিসিআর প্রযুক্তি শুধুমাত্র টিস্যু নমুনাগুলিতে রুটিন গুণগত পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলি সরাসরি সঞ্চালন করে না, তবে এতে রিয়েল-টাইম কিউপিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলিও অন্তর্ভুক্ত থাকে, যার জন্য প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের শক্তিশালী অ্যান্টি-ব্যাকগ্রাউন্ড ফ্লুরোসেন্স হস্তক্ষেপ ক্ষমতা এবং অন্তঃসত্ত্বা প্রতিপ্রভ শক্তি বিরোধী ক্ষমতার প্রয়োজন হয়।

চতুর্থত, ডাইরেক্ট পিসিআর প্রযুক্তি দ্বারা লক্ষ্য করা নমুনাগুলির জন্য শুধুমাত্র নিউক্লিক অ্যাসিড টেমপ্লেট প্রকাশের প্রয়োজন হয় এবং পিসিআর প্রতিক্রিয়াতে হস্তক্ষেপকারী প্রোটিন, পলিস্যাকারাইড, লবণ আয়ন ইত্যাদি অপসারণ করে না।যার জন্য প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে নিউক্লিক অ্যাসিড পলিমারেজ এবং পিসিআর মিক্সের জন্য জটিল পরিস্থিতিতে এনজাইমের কার্যকলাপ এবং প্রতিলিপি নির্ভুলতা নিশ্চিত করতে চমৎকার প্রতিরোধ এবং অভিযোজনযোগ্যতা প্রয়োজন।

পঞ্চম, কোনো নিউক্লিক অ্যাসিড সমৃদ্ধকরণ চিকিত্সা ছাড়াই ডাইরেক্ট পিসিআর প্রযুক্তি দ্বারা লক্ষ্য করা টিস্যুর নমুনা এবং টেমপ্লেটের পরিমাণ খুবই কম, যার জন্য প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের অত্যন্ত উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং পরিবর্ধন দক্ষতা থাকা প্রয়োজন।