আমি বিশ্বাস করি যে পিসিআর প্রতিক্রিয়া করার সময় প্রত্যেকে সর্বদা এই ধরনের বা এই জাতীয় সমস্যার সম্মুখীন হবে, তবে তাদের বেশিরভাগই দুটি প্রধান সমস্যায় শ্রেণীবদ্ধ করা যেতে পারে:

জিন টেমপ্লেটের খুব কম পরিবর্ধন (পরিবর্ধন);
খুব বেশি অ-টার্গেট জিন পরিবর্ধন।
সংযোজন ব্যবহার করা এই সমস্যাগুলি সমাধান করার জন্য একটি সাধারণ কৌশল।সাধারণত additives ভূমিকা দুটি দিক আছে:
গৌণ কাঠামোজিনের (সেকেন্ডারি গঠন);
অ-নির্দিষ্ট প্রাইমিং হ্রাস করুন।
আজ, সম্পাদক সংক্ষিপ্তভাবে আপনাকে PCR প্রতিক্রিয়া এবং তাদের কার্যাবলীর সাধারণ সংযোজনগুলির সাথে পরিচয় করিয়ে দেবেন।
সংযোজন যা গৌণ গঠন হ্রাস করে
সালফক্সাইড(DMSO)
জিনের নমুনাউচ্চ GC সামগ্রী সহ।যাইহোক, DMSO এছাড়াও ব্যাপকভাবে Taq পলিমারেজ কার্যকলাপ হ্রাস করে।অতএব, প্রত্যেককে টেমপ্লেট অ্যাক্সেসযোগ্যতা এবং পলিমারেজের কার্যকলাপের মধ্যে ভারসাম্য বজায় রাখতে হবে।সম্পাদক পরামর্শ দিয়েছেন যে আপনি DSMO এর বিভিন্ন ঘনত্ব চেষ্টা করতে পারেন, যেমন 2% থেকে 10% পর্যন্ত, আপনার পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত ঘনত্ব খুঁজে পেতে।
অ-আয়নিক ডিটারজেন্ট
অ-আয়নিক ডিটারজেন্ট, যেমন 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 বা NP-40, সাধারণত DNA সেকেন্ডারি গঠন হ্রাস করে।যদিও এটি টেমপ্লেট জিনের পরিবর্ধন বৃদ্ধি করতে পারে, এটি অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধনের সমস্যাও সৃষ্টি করবে।সুতরাং, এই সংযোজনগুলি ধ্বংসাবশেষ ছাড়াই কম ফলনযুক্ত পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য ভাল কাজ করে, তবে তুলনামূলকভাবে অশুদ্ধ পিআরসি প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য তেমন ভাল নয়।অ-আয়নিক ডিটারজেন্টের আরেকটি সুবিধা হল SDS দূষণ হ্রাস।সাধারণত ডিএনএ নিষ্কাশন প্রক্রিয়া চলাকালীন, এসডিএসকে পিসিআর ধাপে আনা হবে, যা পলিমারেজের কার্যকলাপকে ব্যাপকভাবে বাধা দেয়।অতএব, প্রতিক্রিয়ায় 0.5% টুইন-20 বা টুইন-40 যোগ করলে এসডিএস-এর নেতিবাচক প্রভাবগুলি নিরপেক্ষ হতে পারে।
বেটেইন_
বেটেইন গৌণ কাঠামো গঠন হ্রাস করে ডিএনএ পরিবর্ধনকে উন্নত করতে পারে এবং এটি সাধারণত বাণিজ্যিক পিসিআর কিটগুলির একটি "রহস্য" সংযোজন।আপনি যদি betaine ব্যবহার করতে চান, তাহলে আপনাকে betaine বা betaine mono-hydrate (Betaine বা Betaine mono-hydrate) রাখতে হবে, কিন্তু betaine hydrochloride (Betaine HCl) নয়, 1-1.7M এর চূড়ান্ত ঘনত্বে সামঞ্জস্য করতে হবে।বেটেইন নির্দিষ্টতা উন্নত করতেও সাহায্য করতে পারে কারণ এটি ডিএনএ গলন/ডিএনএ বিকৃতকরণের বেস জোড়া রচনা নির্ভরতা দূর করে।
অ-নির্দিষ্ট প্রাইমিং কমাতে additives
ফরমামাইড
ফরমামাইড একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত জৈব পিসিআর সংযোজন।এটি ডিএনএ-তে প্রধান খাঁজ এবং ছোট খাঁজের সাথে একত্রিত হতে পারে, যার ফলে মাস্টার ডিএনএ ডাবল হেলিক্সের স্থায়িত্ব হ্রাস করে এবং ডিএনএর গলিত তাপমাত্রা কমিয়ে দেয়।PCR পরীক্ষায় ব্যবহৃত ফরমামাইডের ঘনত্ব সাধারণত 1%-5%।
টেট্রামিথাইলঅ্যামোনিয়াম ক্লোরাইড( TMAC)
টেট্রামেথাইলামোনিয়াম ক্লোরাইড সংকরকরণের নির্দিষ্টতা (সংকরকরণের নির্দিষ্টতা) বৃদ্ধি করতে পারে এবং ডিএনএর গলিত তাপমাত্রা বাড়াতে পারে।এইভাবে, TMAC অ-নির্দিষ্ট প্রাইমিং অপসারণ করতে পারে এবং ডিএনএ এবং আরএনএ-এর মিসবাইন্ডিং কমাতে পারে।ব্যবহার করলেক্ষয়প্রাপ্ত প্রাইমারপিসিআর প্রতিক্রিয়াতে, TMAC যোগ করতে মনে রাখবেন, যা সাধারণত 15-100 মিমি ঘনত্বে ব্যবহৃত হয়।
অন্যান্য সাধারণ সংযোজন
উপরে উল্লিখিত দুটি শ্রেণীর সংযোজন ছাড়াও, পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলিতে অনেকগুলি সাধারণ সংযোজন রয়েছে, যদিও তাদের বিভিন্ন কার্য রয়েছে, সেগুলিও খুব গুরুত্বপূর্ণ।
ম্যাগনেসিয়াম আয়ন
ম্যাগনেসিয়াম আয়ন হল পলিমারেজের একটি অপরিহার্য কোফ্যাক্টর (কোফ্যাক্টর), অর্থাৎ ম্যাগনেসিয়াম আয়ন ছাড়া পলিমারেজ নিষ্ক্রিয়।যাইহোক, অত্যধিক ম্যাগনেসিয়াম আয়ন পলিমারেজের কার্যকারিতাকেও প্রভাবিত করতে পারে।প্রতিটি পিসিআর প্রতিক্রিয়ায় ম্যাগনেসিয়াম আয়নের ঘনত্ব পরিবর্তিত হবে।চেলেটিং এজেন্ট (যেমন EDTA বা citrate), dNTPs এবং প্রোটিনের ঘনত্ব সবই ম্যাগনেসিয়াম আয়নের ঘনত্বকে প্রভাবিত করে।সুতরাং, যদি আপনার পিসিআর পরীক্ষায় সমস্যা হয়, আপনি বিভিন্ন ম্যাগনেসিয়াম আয়ন ঘনত্ব পরিবর্তন করার চেষ্টা করতে পারেন, উদাহরণস্বরূপ, 1.0 থেকে 4.0 মিমি, এর মধ্যে 0.5-1 মিমি ব্যবধান সহ।
এটা লক্ষণীয় যে একাধিক ফ্রিজ-থো চক্র ম্যাগনেসিয়াম ক্লোরাইড দ্রবণের ঘনত্ব স্তরীকরণের দিকে নিয়ে যেতে পারে।অতএব, প্রতিটি ব্যবহারের আগে আপনাকে অবশ্যই এটি সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত করতে হবে এবং এটি ব্যবহার করার আগে এটি ভালভাবে মিশ্রিত করতে হবে।
বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন(বোভাইন অ্যালবুমিন, বিএসএ)
আণবিক রসায়ন পরীক্ষায়, বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন একটি খুব সাধারণ সংযোজন, বিশেষত সীমাবদ্ধ এনজাইম হজম এবং পিসিআর পরীক্ষায়।পিসিআর প্রতিক্রিয়ায়, বিএসএ ফেনোলিক যৌগগুলির মতো দূষিত পদার্থগুলি হ্রাস করতে সহায়ক।এবং এটাও বলা হয় যে এটি টেস্টটিউবের দেয়ালে বিক্রিয়কদের আনুগত্য কমাতে পারে।পিসিআর প্রতিক্রিয়ায়, সাধারণত যোগ করা BSA এর ঘনত্ব 0.8 mg/ml-এ পৌঁছাতে পারে।
 
সংশ্লিষ্ট পণ্য:
পিসিআর হিরো(রঙ দিয়ে)
পিসিআর হিরো