সমস্যা বিশ্লেষণের জন্য গাইড

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

কোনো আরএনএ বের করা যায় না বা নিউক্লিক অ্যাসিডের ফলন কম

সাধারণত অনেকগুলি কারণ রয়েছে যা পুনরুদ্ধারের দক্ষতাকে প্রভাবিত করে, যেমন: নমুনা আরএনএ বিষয়বস্তু, অপারেশনের পদ্ধতি, ইলুশন ভলিউম ইত্যাদি।

সাধারণ কারণ বিশ্লেষণ:

1. বরফ স্নান বা কম-তাপমাত্রা (4 ° C) অপারেশন চলাকালীন সেন্ট্রিফিউগেশন।

পরামর্শ: ঘরের তাপমাত্রা (15-25 ° C) অপারেশন, কখনও বরফ স্নান এবং কম তাপমাত্রা সেন্ট্রিফিউজ।

2. অনুপযুক্ত নমুনা স্টোরেজ বা নমুনা সঞ্চয়স্থান খুব দীর্ঘ জন্য।

পরামর্শ: নমুনাগুলিকে -80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন বা তরল নাইট্রোজেনে হিমায়িত করুন এবং বারবার ফ্রিজ-গলে ব্যবহার এড়িয়ে চলুন;RNA নিষ্কাশনের জন্য সদ্য সংগৃহীত নমুনা ব্যবহার করার চেষ্টা করুন।

3. অপর্যাপ্ত নমুনা lysis

সুপারিশ: অনুগ্রহ করে নিশ্চিত করুন যে নমুনা এবং কার্যকরী সমাধান (লিনিয়ার অ্যাক্রিলামাইড) পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করা হয়েছে এবং ঘরের তাপমাত্রায় (15-25 ডিগ্রি সেলসিয়াস) 10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছে।

4. eluent ভুলভাবে যোগ করা হয়েছে

সুপারিশ: নিশ্চিত করুন যে RNase-মুক্ত ddH2O পরিশোধন কলামের ঝিল্লির মাঝখানে যোগ করা হয়েছে

5. বাফার viRW2-এ অ্যানহাইড্রাস ইথানলের অনুপযুক্ত আয়তন

পরামর্শ: অনুগ্রহ করে নির্দেশাবলী অনুসরণ করুন, বাফার viRW2-এ অ্যানহাইড্রাস ইথানলের সঠিক ভলিউম যোগ করুন এবং কিট ব্যবহার করার আগে সেগুলিকে ভালভাবে মিশ্রিত করুন।

6. অনুপযুক্ত নমুনা ব্যবহার.

পরামর্শ: প্রতি 500μl বাফার viRL এর 200μl নমুনা।অত্যধিক নমুনা ভলিউমের ফলে আরএনএ নিষ্কাশন হার কমে যাবে।

7. অনুপযুক্ত ইলিউশন ভলিউম বা অসম্পূর্ণ ইলিউশন।

পরামর্শ: পরিশোধন কলামের ইলুয়েন্ট ভলিউম 30-50μl;যদি ইলুশন প্রভাব সন্তোষজনক না হয়, তাহলে প্রি-হিটেড RNase-ফ্রি ddH যোগ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।₂O এবং ঘরের তাপমাত্রায় রাখার সময় বাড়ান, যেমন 5-10 মিনিট

8. বিশুদ্ধকরণ কলামে বাফার viRW2 এ ধুয়ে ফেলার পর ইথানলের অবশিষ্টাংশ থাকে।

পরামর্শ: বাফার viRW2 এবং খালি-টিউব সেন্ট্রিফিউগেশন 2 মিনিটের জন্য ধুয়ে ফেলার পরেও যদি ইথানল থেকে যায়, তবে অবশিষ্ট ইথানল সম্পূর্ণরূপে অপসারণের জন্য খালি-টিউব সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে পরিশোধন কলামটি 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় রেখে দেওয়া যেতে পারে।

বিশুদ্ধ আরএনএ অণুর অবক্ষয়

বিশুদ্ধ RNA-এর গুণমান নমুনা স্টোরেজ, RNase দূষণ এবং অপারেশনের মতো বিষয়গুলির সাথে সম্পর্কিত।

সাধারণ কারণ বিশ্লেষণ:

1. সংগৃহীত নমুনা সময়মতো সংরক্ষিত হয়নি।

পরামর্শ: সংগ্রহের পরে যদি নমুনাটি সময়মতো ব্যবহার না করা হয়, তাহলে অনুগ্রহ করে তা অবিলম্বে -80 ℃ বা তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করুন।আরএনএ অণু নিষ্কাশনের জন্য, যখনই সম্ভব সদ্য সংগ্রহ করা নমুনাগুলি ব্যবহার করার চেষ্টা করুন।

2. সংগৃহীত নমুনাগুলো বারবার জমাট বেঁধে গলে যাচ্ছিল।

পরামর্শ: নমুনা সংগ্রহ এবং সংরক্ষণের সময় বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো (একবার বেশি নয়) এড়িয়ে চলুন, অন্যথায় নিউক্লিক অ্যাসিডের ফলন কমে যাবে।

3. RNase অপারেটিং রুমে চালু করা হয়েছিল বা কোন ডিসপোজেবল গ্লাভস, মাস্ক ইত্যাদি পরা হয়নি।

পরামর্শ: আরএনএ অণু পরীক্ষার নিষ্কাশন একটি পৃথক আরএনএ অপারেশন রুমে সর্বোত্তম সঞ্চালিত হয় এবং পরীক্ষার আগে পরীক্ষামূলক টেবিলটি পরিষ্কার করা হয়।পরীক্ষার সময় ডিসপোজেবল গ্লাভস এবং মাস্ক পরুন যাতে RNase প্রবর্তনের ফলে RNA ক্ষয় এড়াতে হয়।

4. রিএজেন্ট ব্যবহারের সময় RNase দ্বারা দূষিত হয়।

পরামর্শ: সম্পর্কিত পরীক্ষার জন্য নতুন ভাইরাল আরএনএ আইসোলেশন কিট দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।

5. সেন্ট্রিফিউজ টিউব, পাইপেট টিপস, ইত্যাদির RNase দূষণ। পরামর্শ: নিশ্চিত করুন যে সেন্ট্রিফিউজ টিউব, পাইপেট টিপস এবং পাইপেটগুলি সবই RNase-মুক্ত।

পরিশোধিত আরএনএ অণুগুলি ডাউনস্ট্রিম পরীক্ষাগুলিকে প্রভাবিত করে

বিশুদ্ধকরণ কলাম দ্বারা বিশুদ্ধ করা RNA অণুগুলি যদি খুব বেশি লবণ আয়ন বা প্রোটিন থাকে, যেমন: রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন, নর্দার্ন ব্লট, ইত্যাদি থাকলে ডাউনস্ট্রিম পরীক্ষাকে প্রভাবিত করবে।

1. বিলুপ্ত আরএনএ অণুতে অবশিষ্ট লবণ আয়ন রয়েছে।

প্রস্তাবনা: নিশ্চিত করুন যে বাফার viRW2 এ অ্যানহাইড্রাস ইথানলের সঠিক ভলিউম যোগ করা হয়েছে, এবং অপারেটিং নির্দেশাবলীতে সঠিক সেন্ট্রিফিউগেশন গতি অনুসারে বিশুদ্ধকরণ কলামটি দুবার ধুয়ে ফেলুন; যদি এখনও লবণের আয়ন অবশিষ্ট থাকে, তাহলে আপনি বিশুদ্ধকরণ কলামে বাফার viRW2 যোগ করতে পারেন এবং ঘরের তাপমাত্রা 5 মিনিটের জন্য রেখে দিতে পারেন।তারপর সর্বাধিক পরিমাণে লবণ আয়ন দূষণ অপসারণ করতে সেন্ট্রিফিউগেশন সঞ্চালন করুন

2. বিলুপ্ত আরএনএ অণুতে ইথানল অবশিষ্ট আছে

পরামর্শ: একবার নিশ্চিত হয়ে গেলে যে বিশুদ্ধকরণ কলামগুলি বাফার viRW2 দ্বারা ধুয়ে ফেলা হয়েছে, অপারেটিং নির্দেশাবলীতে সেন্ট্রিফিউগাল গতি অনুসারে খালি-টিউব সেন্ট্রিফিউগেশন সঞ্চালন করুন।যদি এখনও ইথানল অবশিষ্ট থাকে, তবে অবশিষ্ট ইথানলটিকে সর্বাধিক পরিমাণে অপসারণের জন্য একটি খালি-টিউব সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য রেখে দেওয়া যেতে পারে।

নির্দেশিকা ম্যানুয়াল:

ভাইরাল আরএনএ আইসোলেশন কিট নির্দেশিকা ম্যানুয়াল