• ফেসবুক
  • লিঙ্কডইন
  • ইউটিউব

প্রথাগত বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেস উচ্চ তাপমাত্রা সহ্য করতে পারে না (MMLV কার্যকলাপের জন্য সর্বোত্তম তাপমাত্রা হল 37-50°C, এবং AMV হল 42-60°C)।আরও জটিল ভাইরাল আরএনএ কম তাপমাত্রায় কার্যকরভাবে সিডিএনএ-তে প্রতিলিপি করা যায় না, যার ফলে সনাক্তকরণের দক্ষতা হ্রাস পায়।প্রথাগত RT-qPCR-এর জন্য সাধারণত দুটি মূল এনজাইমের (রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ এবং ডিএনএ পলিমারেজ) অংশগ্রহণ প্রয়োজন, যা প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের অপারেশনকে সহজ করা এবং খরচ কমানো অসম্ভব করে তোলে।এখানে আমরা দুটি উচ্চ-তাপমাত্রা-প্রতিরোধী বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেস, TtH এবং RevTaq প্রবর্তন করব।এই দুটি এনজাইমের ডিএনএ পলিমারেজের কাজও রয়েছে, তাই তাদের দ্বি-ফাংশনাল এনজাইম বলা হয়।

TtH DNA পলিমারেজ

আপনি অবশ্যই TtH সম্পর্কে শুনেছেন, যা থার্মোফিলিক ব্যাকটেরিয়া থার্মাস থার্মোফিলাস HB8 থেকে উদ্ভূত।Mg2+ এর মতো দ্বি-ভাজন ক্যাটেশনের উপস্থিতিতে, এটির ডিএনএ পলিমারেজ কার্যকলাপ রয়েছে।এটি Taq এনজাইমের মতো PCR বিক্রিয়ায় ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়, কিন্তু Taq এনজাইমের তুলনায় এটির তাপ প্রতিরোধ ক্ষমতা বেশি, তাই এটি উচ্চ GC বিষয়বস্তু টেমপ্লেটের সাথে PCR-তেও ভালো প্রভাব ফেলে।

· এই এনজাইমে মূলত কোন 3′→5′ exonuclease কার্যকলাপ এবং 5′→3′ exonuclease কার্যকলাপ নেই, তাই এটি ডিডিঅক্সি সিকোয়েন্সিংয়ের জন্যও ব্যবহার করা যেতে পারে।

এই এনজাইমের RTase কার্যকলাপ আছে।Mn2+ এর উপস্থিতিতে, RTase কার্যকলাপ উন্নত করা হবে।এই বৈশিষ্ট্যটি ব্যবহার করে, এটি একই টিউবে বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন প্রতিক্রিয়া এবং পিসিআর প্রতিক্রিয়া সঞ্চালনের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে, অর্থাৎ এক-ধাপে RT-PCR।যাইহোক, Mn2+ এর উপস্থিতিতে, RT-PCR এর নির্ভুলতা বেশি নয়।Rnaase H কার্যকলাপের সাথে আরটি কার্যকলাপের কোন সম্পর্ক নেই।

· Tth-DNA পলিমারেজের বর্ধিত ক্রিয়াকলাপ (pH9, সর্বোত্তম +55℃~+70℃, সর্বোচ্চ +95℃) RNA সেকেন্ডারি কাঠামোর কারণে সৃষ্ট সমস্যাগুলিকে অতিক্রম করে।Mg2+ আয়নগুলির উপস্থিতিতে একই এনজাইম দিয়ে পিসিআর দ্বারা ফলস্বরূপ সিডিএনএ প্রশস্ত করা যেতে পারে।

· Tth-DNA পলিমারেজের উচ্চ তাপমাত্রায় বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন এবং ডিএনএ পরিবর্ধন করার ক্ষমতা এই এনজাইমটিকে পরিমাণগত RT-PCR, ক্লোনিং এবং সেলুলার এবং ভাইরাল RNA এর জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের জন্য দরকারী করে তোলে।
· Tth-DNA পলিমারেজ RT-PCR এর জন্য RNA কে 1kb পর্যন্ত প্রসারিত করতে ব্যবহৃত হয়।

খালি
 

বৈশিষ্ট্য এবং সুবিধা

Tth DNA পলিমারেজ:

• অপ্টিমাইজড পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (PCR) পণ্যের আকার নিশ্চিত করুন, RT-PCR বিক্রিয়ায় কমপক্ষে 1000 bp

• পরিবর্তিত ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওসাইড ট্রাইফসফেটকে সাবস্ট্রেট হিসেবে গ্রহণ করুন

• RNase H কার্যকলাপের সাথে সম্পর্কিত নয়

• সমস্যাগুলি কাটিয়ে উঠতে উচ্চ তাপীয় স্থিতিশীলতা রয়েছে, সাধারণত RNA-তে উপস্থিত উচ্চ মাধ্যমিক কাঠামোর সাথে সম্পর্কিত

RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ

বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ কার্যকলাপ সহ একটি তাপ-প্রতিরোধী ডিএনএ পলিমারেজ

RevTaq-RT-PCR-DNA পলিমারেজ হল একটি প্রকৌশলী, অত্যন্ত তাপ-প্রতিরোধী, দ্বৈত-কার্যকরী এনজাইম যার বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ এবং ডিএনএ পলিমারেজ কার্যক্রম নির্দেশিত এবং কৃত্রিম বিবর্তনের মাধ্যমে প্রাপ্ত।

· রেভটাক আরটি-পিসিআর ডিএনএ পলিমারেজের 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসের অর্ধ-জীবন 40 মিনিটের বেশি।

· RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ RNA টেমপ্লেট থেকে সরাসরি উচ্চ-তাপমাত্রার বিপরীত ট্রান্সক্রিপশনের অনুমতি দেয় এবং আরও সিডিএনএ টেমপ্লেট তৈরি করতে বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন ধাপটি একাধিকবার পুনরাবৃত্তি করা যেতে পারে।

· RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ "শূন্য-পদক্ষেপ" RT-PCR (কোনও আইসোথার্মাল রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন স্টেপ নয়), কারণ সাইক্লিক পিসিআর এক্সটেনশন ধাপে, রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন এবং ডিএনএ পরিবর্ধন একই সাথে ঘটে।এটি উচ্চ তাপমাত্রায় বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন প্রতিক্রিয়াকেও উৎসাহিত করে, যার ফলে উচ্চ তাপমাত্রায় RNA-তে শক্তিশালী গৌণ কাঠামো গলতে সমস্যাগুলি হ্রাস করা হয়।

· অ্যাপটামার-ভিত্তিক হট-স্টার্ট সূত্রের কারণে, রেভটাক আরটি-পিসিআর ডিএনএ পলিমারেজ যখন অ্যানিলিং এবং এক্সটেনশন তাপমাত্রা 57 ডিগ্রি সেলসিয়াসের বেশি হয় তখন আরও ভাল ফলাফল দেবে।

· যেহেতু এনজাইম তাপ-প্রতিরোধী, তাই খুব উচ্চ গলনাঙ্ক (>60°C) সহ প্রাইমার এবং প্রোব ডিজাইন করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

· প্রতিক্রিয়া সেটআপ প্রক্রিয়া চলাকালীন তাপমাত্রা গ্রেডিয়েন্টের মাধ্যমে অ্যানিলিং/এক্সটেনশন ধাপের তাপমাত্রা অপ্টিমাইজ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

· তাপমাত্রা যত বেশি হবে, পিসিআরের নির্দিষ্টতা তত বেশি হবে।বিপরীত প্রতিলিপি চক্র সাধারণত পিসিআর চক্রের তুলনায় উচ্চ তাপমাত্রায় সঞ্চালিত হয়, কারণ ডিএনএ প্রাইমার:আরএনএ টেমপ্লেট হাইব্রিডাইজেশনে সাধারণত ডিএনএ প্রাইমার:সিডিএনএ টেমপ্লেট ডুপ্লেক্সের চেয়ে উচ্চতর গলনাঙ্ক থাকে।

· RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ জেনেটিক্যালি ইঞ্জিনিয়ারড এবং অপ্টিমাইজ করা হয়েছে এবং অ্যামপ্লিকন সাইজ 60-300 bp এর মধ্যে।

RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ সনাক্তকরণ সীমা 4 কপিতে পৌঁছেছে/দুই (2)

অপ্টিমাইজড প্রতিক্রিয়া সিস্টেম (উচ্চ গলনাঙ্ক প্রাইমার স্থাপন) চিত্রে দেখানো হয়েছে।RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ-চালিত RT-PCR TaqPath 1-পদক্ষেপ RT-qPCR মাস্টার মিশ্রণের চেয়ে ভাল সংবেদনশীলতা দেখায় এবং নিম্ন সনাক্তকরণ নমুনা পাতলা গ্রেডিয়েন্ট।

আরও সুবিধা:

দ্রুত সূচনা ফাংশন → প্রাথমিক তাপীয় বিকৃতকরণ ধাপটি এড়িয়ে যাওয়া যেতে পারে।

হট-স্টার্ট অ্যাপটামার সূত্র → অবিলম্বে 100% এনজাইম কার্যকলাপ প্রদান করুন এবং নিম্ন তাপমাত্রায় (<57°C) অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন প্রতিরোধ করুন।

ক্লিভেজ ফাংশন → RNA নিষ্কাশন পদক্ষেপ বাদ দেওয়া হয়েছে, কারণ RevTaq RT-PCR DNA পলিমারেজ অশোধিত প্রতিক্রিয়া নমুনাগুলিও প্রক্রিয়া করতে পারে।এটি অবিলম্বে একটি গরম RT-PCR চক্রে ইউক্যারিওটস, ব্যাকটেরিয়া এবং ভাইরাসের কোষের ঝিল্লি ধ্বংস করতে পারে।

IVD কাঁচামাল স্তর → উচ্চ মানের মান এবং অত্যন্ত প্রতিযোগিতামূলক দাম


পোস্টের সময়: আগস্ট-১২-২০২১