আমার মনে সনাক্তকরণ প্রযুক্তির ইতিহাসে বেশ কিছু বৈপ্লবিক উদ্ভাবন হল অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি নির্দিষ্ট বাঁধাই, পিসিআর প্রযুক্তি এবং সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তির নীতির উপর ভিত্তি করে ইমিউনোলেবেলিং প্রযুক্তি।আজ আমরা PCR প্রযুক্তি নিয়ে কথা বলব।পিসিআর প্রযুক্তির বিবর্তন অনুসারে, মানুষ অভ্যাসগতভাবে পিসিআর প্রযুক্তিকে তিনটি প্রজন্মে ভাগ করে: সাধারণ পিসিআর প্রযুক্তি, রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর প্রযুক্তি এবং ডিজিটাল পিসিআর প্রযুক্তি।
Common PCR কৌশল
ক্যারি মুলিস (1944.12.28-2019.8.7)
ক্যারি মুলিস 1983 সালে পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন , পিসিআর) উদ্ভাবন করেন। বলা হয় যে তিনি যখন তার বান্ধবীকে গাড়ি চালাচ্ছিলেন, তখন তিনি হঠাৎ করে পিসিআর (ড্রাইভিং এর সুবিধার উপর) নীতির বিষয়ে অনুপ্রেরণার ঝলকান এবং চিন্তা করেছিলেন।ক্যারি মুলিস 1993 সালে রসায়নে নোবেল পুরস্কারে ভূষিত হন। নিউ ইয়র্ক টাইমস মন্তব্য করেছে: "অত্যন্ত মৌলিক এবং তাৎপর্যপূর্ণ, প্রায় জীববিজ্ঞানকে প্রাক-পিসিআর এবং পিসিআর-পরবর্তী যুগে বিভক্ত করে।
পিসিআর-এর নীতি: ডিএনএ পলিমারেজের অনুঘটকের অধীনে, মাদার স্ট্র্যান্ড ডিএনএ টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা হয়, এবং নির্দিষ্ট প্রাইমারটি এক্সটেনশনের সূচনা বিন্দু হিসাবে ব্যবহার করা হয়, এবং মাদার স্ট্র্যান্ড টেমপ্লেট ডিএনএর পরিপূরক কন্যা স্ট্র্যান্ড ডিএনএ ডিনাচুরেশন, অ্যানিলিং, এক্সটেনশন এবং অন্যান্য ধাপের মাধ্যমে ভিট্রোতে অনুলিপি করা হয়।এটি ভিট্রোতে একটি ডিএনএ সংশ্লেষণ পরিবর্ধন প্রযুক্তি, যা ভিট্রোতে যেকোনো লক্ষ্য ডিএনএকে দ্রুত এবং বিশেষভাবে প্রসারিত করতে পারে।
সাধারণ PCR এর সুবিধা
1.ক্লাসিক পদ্ধতি, সম্পূর্ণ আন্তর্জাতিক এবং দেশীয় মান
2.যন্ত্র বিকারক কম খরচ
3.PCR পণ্যগুলি অন্যান্য আণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষার জন্য পুনরুদ্ধার করা যেতে পারে
প্রস্তাবিত ফোরজিন পিসিআর মেশিন: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
সম্পর্কিত পণ্য: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
সাধারণ পিসিআর এর অসুবিধা
1.দূষিত করা সহজ
2.কষ্টকর অপারেশন
3.শুধুমাত্র গুণগত বিশ্লেষণ
4.মাঝারি সংবেদনশীলতা
5.অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন আছে, এবং যখন অ-নির্দিষ্ট ব্যান্ডটি লক্ষ্য ব্যান্ডের আকারের সমান হয়, তখন এটি আলাদা করা যায় না
Cঅ্যাপিলারি ইলেক্ট্রোফোরেসিস-ভিত্তিক পিসিআর
সাধারণ পিসিআর-এর ত্রুটিগুলির প্রতিক্রিয়া হিসাবে, কিছু নির্মাতারা কৈশিক ইলেক্ট্রোফোরসিসের নীতির উপর ভিত্তি করে যন্ত্র চালু করেছেন।পিসিআর পরিবর্ধনের পর ইলেক্ট্রোফোরসিস ধাপটি কৈশিকের মধ্যে সম্পন্ন হয়।সংবেদনশীলতা বেশি, এবং বেশ কয়েকটি ঘাঁটির পার্থক্য আলাদা করা যায় এবং MAERKER দ্বারা পরিবর্ধন গণনা করা যেতে পারে।পণ্য সামগ্রী।অসুবিধা হল যে পিসিআর পণ্যটি এখনও খুলতে হবে এবং যন্ত্রের মধ্যে রাখতে হবে এবং এখনও দূষণের একটি বড় ঝুঁকি রয়েছে।
CএপিলারিEলেকট্রোফোরেসিস
2. রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্ট কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর (কোয়ান্টিটেটিভ রিয়েল-টাইম পিসিআর, কিউপিসিআর) প্রযুক্তিফ্লুরোসেন্ট কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর, যাকে রিয়েল-টাইম পিসিআরও বলা হয়, এটি একটি নতুন নিউক্লিক অ্যাসিড পরিমাণগত প্রযুক্তি যা 1995 সালে PE (Perkin Elmer) দ্বারা তৈরি করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত PCR-এর বিকাশের ইতিহাস হল ABI, Roche এবং Bio-IR-এর মতো দৈত্যদের আত্মা-আলোড়নকারী সংগ্রামের ইতিহাস।আপনি আগ্রহী হলে, আপনি এটি পরীক্ষা করে দেখতে পারেন.এই কৌশলটি বর্তমানে সবচেয়ে পরিপক্ক এবং ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত আধা-পরিমাণগত পিসিআর কৌশল।
প্রস্তাবিত qPCR মেশিন:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
ফ্লুরোসেন্ট ডাই পদ্ধতি (SYBR Green I):পরিমাণগত পিসিআর-এর জন্য SYBR গ্রীন I হল সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত ডিএনএ-বাইন্ডিং ডাই, যা অ-বিশেষভাবে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএর সাথে আবদ্ধ করে।মুক্ত অবস্থায়, এসওয়াইবিআর গ্রিন দুর্বল ফ্লুরোসেন্স নির্গত করে, কিন্তু একবার ডবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-তে আবদ্ধ হলে, এর ফ্লুরোসেন্স 1000-গুণ বেড়ে যায়।অতএব, একটি বিক্রিয়া দ্বারা নির্গত মোট ফ্লুরোসেন্ট সংকেত উপস্থিত ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-এর পরিমাণের সমানুপাতিক এবং পরিবর্ধিত পণ্যের বৃদ্ধির সাথে বৃদ্ধি পাবে।যেহেতু ডাইটি অ-বিশেষভাবে ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএর সাথে আবদ্ধ হয়, তাই মিথ্যা ইতিবাচক ফলাফল তৈরি হতে পারে।
সম্পর্কিত পণ্য: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
ফ্লুরোসেন্ট প্রোব পদ্ধতি (তাকমান প্রযুক্তি): চলাকালীনপিসিআর পরিবর্ধন, একটি নির্দিষ্ট ফ্লুরোসেন্ট প্রোব একই সময়ে প্রাইমারের জোড়া হিসাবে যোগ করা হয়।প্রোবটি একটি রৈখিক অলিগোনিউক্লিওটাইড, যার উভয় প্রান্তে যথাক্রমে একটি ফ্লুরোসেন্ট রিপোর্টার গ্রুপ এবং একটি ফ্লুরোসেন্ট quencher গ্রুপ লেবেলযুক্ত।যখন প্রোব অক্ষত থাকে, রিপোর্টার গ্রুপ দ্বারা নির্গত ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল quencher গ্রুপ দ্বারা শোষিত হয়, এবং সনাক্তকরণ কোন ফ্লুরোসেন্ট সংকেত নেই;PCR পরিবর্ধনের সময় (এক্সটেনশন পর্যায়ে), Taq এনজাইমের 5'-3' ডাইসার কার্যকলাপ হজম করবে এবং প্রোবকে অবনমিত করবে, যাতে রিপোর্টার ফ্লুরোসেন্ট গ্রুপ এবং quencher ফ্লুরোসেন্ট গ্রুপকে আলাদা করা হয়, যাতে ফ্লুরোসেন্স মনিটরিং সিস্টেম ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল প্রাপ্ত করা যায়, অর্থাৎ, প্রতিবার একটি ফ্লুরোসেন্ট ফ্লুরোসেন্ট ফ্লুরোসেন্ট ফ্লোরোসেন্ট গ্রুপকে আলাদা করা হয়। ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল জমে এবং পিসিআর পণ্য গঠনের সম্পূর্ণ সিঙ্ক্রোনাইজেশনকে izes করে।তাকমান প্রোব পদ্ধতি হল ক্লিনিকাল সনাক্তকরণে সর্বাধিক ব্যবহৃত সনাক্তকরণ পদ্ধতি।
সম্পর্কিত পণ্য: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
qPCR এর সুবিধা
1.পদ্ধতিটি পরিপক্ক এবং সমর্থনকারী সরঞ্জাম এবং বিকারক সম্পূর্ণ
2.বিকারক মাঝারি খরচ
3.ব্যবহার করা সহজ
4.উচ্চ সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা
qPCR এর অসুবিধা
লক্ষ্য জিনের মিউটেশন মিস সনাক্তকরণের দিকে পরিচালিত করে।
কম ঘনত্ব টেমপ্লেট সনাক্তকরণ ফলাফল নির্ধারণ করা যাবে না.
পরিমাণগত সনাক্তকরণের জন্য স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ব্যবহার করার সময় একটি বড় ত্রুটি রয়েছে।
3. ডিজিটাল পিসিআর (ডিজিটাল পিসিআর, ডিপিসিআর) প্রযুক্তি
ডিজিটাল পিসিআর হল নিউক্লিক অ্যাসিড অণুর পরম পরিমাণ নির্ধারণের একটি কৌশল।qPCR এর সাথে তুলনা করে, ডিজিটাল PCR সরাসরি DNA/RNA অণুর সংখ্যা পড়তে পারে, যা শুরুর নমুনায় নিউক্লিক অ্যাসিড অণুর পরম পরিমাপ।1999 সালে, বার্ট ভোগেলস্টেইন এবং কেনেথ ডব্লিউ কিন-জলার আনুষ্ঠানিকভাবে dPCR ধারণাটি প্রস্তাব করেন।
2006 সালে, Fluidigm প্রথম একটি বাণিজ্যিক চিপ-ভিত্তিক dPCR যন্ত্র তৈরি করে।2009 সালে, Life Technologies OpenArray এবং QuantStudio 12K Flex dPCR সিস্টেম চালু করেছে।2013 সালে, লাইফ টেকনোলজিস QuantStudio 3DdPCR সিস্টেম চালু করেছে, যা 20,000 পৃথক কোষে সমানভাবে নমুনা বিতরণ করতে উচ্চ-ঘনত্বের ন্যানোস্কেল মাইক্রোফ্লুইডিক চিপ প্রযুক্তি ব্যবহার করে।প্রতিক্রিয়া ভাল.
2011 সালে, Bio-Rad ড্রপলেট-ভিত্তিক QX100 dPCR যন্ত্র চালু করে, যেটি 20,000 ড্রপলেট-ওয়াটার-ইন-অয়েলে নমুনাকে সমানভাবে বিতরণ করতে ওয়াটার-ইন-অয়েল প্রযুক্তি ব্যবহার করে এবং ফোঁটা বিশ্লেষণ করার জন্য একটি ড্রপলেট বিশ্লেষক ব্যবহার করে।2012 সালে, RainDance প্রতিটি স্ট্যান্ডার্ড রিঅ্যাকশন সিস্টেমকে 1 মিলিয়ন থেকে 10 মিলিয়ন পিকোলিটার-লেভেল মাইক্রো-ড্রপলেট সমন্বিত একটি প্রতিক্রিয়া ইমালশনে বিভক্ত করার জন্য উচ্চ-চাপ গ্যাস দ্বারা চালিত RainDrop dPCR যন্ত্র চালু করেছিল।
এখন পর্যন্ত, ডিজিটাল পিসিআর দুটি প্রধান দল গঠন করেছে, চিপ টাইপ এবং ড্রপলেট টাইপ।ডিজিটাল পিসিআর যে ধরনেরই হোক না কেন, এর মূল নীতি হল তরলীকরণ, এন্ডপয়েন্ট পিসিআর এবং পয়সন বিতরণ সীমিত।নিউক্লিক অ্যাসিড টেমপ্লেট সমন্বিত স্ট্যান্ডার্ড পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি সমানভাবে কয়েক হাজার পিসিআর প্রতিক্রিয়াতে বিভক্ত, যা চিপস বা মাইক্রোড্রপলেটগুলিতে বিতরণ করা হয়, যাতে প্রতিটি প্রতিক্রিয়ায় যতটা সম্ভব একটি টেমপ্লেট অণু থাকে এবং একটি একক-অণু টেমপ্লেট পিসিআর প্রতিক্রিয়া সঞ্চালিত হয়।ফ্লুরোসেন্স পড়ার মাধ্যমে সিগন্যালের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি গণনা করা হয় এবং পরিসংখ্যানগত পয়সন বিতরণের ক্রমাঙ্কনের পর পরম পরিমাণ নির্ণয় করা হয়।
আমি ব্যবহার করেছি এমন কয়েকটি ডিজিটাল পিসিআর প্ল্যাটফর্মের বৈশিষ্ট্য নিম্নরূপ:
1. বায়ো-র্যাড QX200 ড্রপলেট ডিজিটাল পিসিআর বায়ো-র্যাডQX200 হল একটি খুব ক্লাসিক ডিজিটাল PCR প্ল্যাটফর্ম, প্রাথমিক সনাক্তকরণ প্রক্রিয়া: 20,000 নমুনা ড্রপলেট জেনারেটর দ্বারা তৈরি করা হয় জল-ইন-অয়েল মাইক্রো-ড্রপলেটগুলি একটি সাধারণ PCR মেশিনে প্রশস্ত করা হয় এবং অবশেষে প্রতিটি মাইক্রো-ড্রপলেটের ফ্লুরোসেন্স সংকেত একটি মাইক্রো-ড্রপলেট রিডার দ্বারা পড়া হয়।অপারেশন আরও জটিল, এবং দূষণের ঝুঁকি মাঝারি।
Xinyi TD1 মাইক্রো-ড্রপলেট ডিজিটাল পিসিআরXinyi TD1 হল একটি গার্হস্থ্য ডিজিটাল PCR প্ল্যাটফর্ম, প্রাথমিক সনাক্তকরণ প্রক্রিয়া: একটি ড্রপলেট জেনারেটরের মাধ্যমে 30,000-50,000 জল-ইন-অয়েল ড্রপলেট তৈরি করুন, একটি সাধারণ PCR যন্ত্রে প্রসারিত করুন এবং অবশেষে পাস করুন ড্রপলেট রিডার প্রতিটি ফোঁটার ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল পড়ে৷এই প্ল্যাটফর্মে ড্রপলেট জেনারেশন এবং রিডিং উভয়ই দূষণের কম ঝুঁকি সহ একটি ডেডিকেটেড চিপে সঞ্চালিত হয়।
স্টিলা নাইকা মাইক্রো-ড্রপলেট চিপ ডিজিটাল পিসিআরSTILLA Naica একটি অপেক্ষাকৃত নতুন ডিজিটাল PCR প্ল্যাটফর্ম।প্রাথমিক সনাক্তকরণ প্রক্রিয়া হল: চিপে প্রতিক্রিয়া সমাধান যোগ করুন, চিপটিকে মাইক্রো-ড্রপলেট জেনারেশন এবং অ্যামপ্লিফিকেশন সিস্টেমে রাখুন এবং 30,000 মাইক্রো-ড্রপলেট তৈরি করুন।চিপে ছড়িয়ে পড়ে এবং পিসিআর পরিবর্ধন চিপে সম্পন্ন হয়।তারপরে পরিবর্ধিত চিপটি মাইক্রো-ড্রপলেট রিডিং অ্যানালাইসিস সিস্টেমে স্থানান্তরিত হয় এবং ছবি তোলার মাধ্যমে ফ্লুরোসেন্ট সংকেত পড়া হয়।যেহেতু সম্পূর্ণ প্রক্রিয়াটি একটি বন্ধ চিপে সঞ্চালিত হয়, তাই দূষণের ঝুঁকি কম।
4. ThermoFisher QuantStudio 3D চিপ ডিজিটাল PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D হল আরেকটি ক্লাসিক চিপ-ভিত্তিক ডিজিটাল PCR প্ল্যাটফর্ম।এর প্রাথমিক সনাক্তকরণ প্রক্রিয়াটি হল: স্প্রেডারের মধ্যে প্রতিক্রিয়া সমাধান যোগ করুন এবং স্প্রেডারের মাধ্যমে 20,000 মাইক্রোওয়েলের সাথে চিপে সমানভাবে প্রতিক্রিয়া দ্রবণটি ছড়িয়ে দিন।, প্রশস্ত করতে পিসিআর মেশিনে চিপ রাখুন এবং অবশেষে রিডারে চিপ রাখুন এবং ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল পড়ার জন্য একটি ছবি তুলুন।অপারেশনটি তুলনামূলকভাবে জটিল, এবং পুরো প্রক্রিয়াটি একটি বন্ধ চিপে বাহিত হয় এবং দূষণের ঝুঁকি কম।
5. JN MEDSYS ক্ল্যারিটি চিপ ডিজিটাল পিসিআর
JN MEDSYS Clarity একটি অপেক্ষাকৃত নতুন চিপ-টাইপ ডিজিটাল PCR প্ল্যাটফর্ম।এর প্রাথমিক সনাক্তকরণ প্রক্রিয়াটি হল: অ্যাপ্লিকেটারে প্রতিক্রিয়া দ্রবণ যোগ করুন এবং আবেদনকারীর মাধ্যমে পিসিআর টিউবে স্থির 10,000 পিসিআর টিউবে সমানভাবে প্রতিক্রিয়া সমাধান ছড়িয়ে দিন।মাইক্রোপোরাস চিপে, প্রতিক্রিয়া দ্রবণ কৈশিক ক্রিয়ার মাধ্যমে চিপে প্রবেশ করে, এবং চিপ সহ পিসিআর টিউবটি প্রশস্তকরণের জন্য পিসিআর মেশিনে স্থাপন করা হয় এবং অবশেষে একটি ফটো তোলার মাধ্যমে ফ্লুরোসেন্ট সংকেত পড়ার জন্য চিপটিকে রিডারে রাখা হয়।অপারেশন আরও জটিল।দূষণের ঝুঁকি কম।
প্রতিটি ডিজিটাল পিসিআর প্ল্যাটফর্মের পরামিতিগুলি নিম্নরূপ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে:
ডিজিটাল পিসিআর প্ল্যাটফর্মের মূল্যায়ন সূচকগুলি হল: বিভক্ত ইউনিটের সংখ্যা, ফ্লুরোসেন্ট চ্যানেলের সংখ্যা, অপারেশনের জটিলতা এবং দূষণের ঝুঁকি।তবে সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বিষয় হল সনাক্তকরণের নির্ভুলতা।ডিজিটাল পিসিআর প্ল্যাটফর্মগুলি মূল্যায়ন করার একটি উপায় হল একে অপরকে যাচাই করার জন্য একাধিক ডিজিটাল পিসিআর প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করা এবং আরেকটি উপায় হল সঠিক মান সহ মানক পদার্থ ব্যবহার করা।
dPCR এর সুবিধা
1.পরম পরিমাপ অর্জন
2.উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা
3.কম কপি নমুনা সনাক্ত করতে পারেন
dPCR এর অসুবিধা1. ব্যয়বহুল সরঞ্জাম এবং বিকারক 2. জটিল অপারেশন এবং দীর্ঘ সনাক্তকরণ সময় 3. সংকীর্ণ সনাক্তকরণ পরিসীমা
বর্তমানে, পিসিআর প্রযুক্তির তিনটি প্রজন্মের নিজস্ব সুবিধা এবং অসুবিধা রয়েছে এবং প্রতিটির নিজস্ব প্রয়োগ ক্ষেত্র রয়েছে এবং এটি এমন সম্পর্ক নয় যে একটি প্রজন্ম অন্য প্রজন্মকে প্রতিস্থাপন করে।প্রযুক্তির ক্রমাগত অগ্রগতি পিসিআর প্রযুক্তিতে নতুন প্রাণশক্তি ঢেলে দিয়েছে, এটিকে একের পর এক প্রয়োগের দিক আনলক করতে সক্ষম করে, নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণকে আরও সুবিধাজনক এবং নির্ভুল করে তুলেছে।
উত্স: ডাঃ ইউয়ান আপনাকে পরীক্ষার জন্য নিয়ে যায়
প্রস্তাবিত পণ্য:
পোস্টের সময়: নভেম্বর-18-2022
