• ফেসবুক
  • লিঙ্কডইন
  • ইউটিউব

পিসিআর হল সর্বাধিক ব্যবহৃত নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধন প্রযুক্তি এবং এটির সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতার কারণে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।যাইহোক, পিসিআর-এর জন্য বারবার তাপীয় বিচ্ছিন্নকরণের প্রয়োজন হয় এবং যন্ত্র এবং সরঞ্জামের উপর নির্ভর করার সীমাবদ্ধতা থেকে মুক্তি পেতে পারে না, যা ক্লিনিকাল ক্ষেত্রের পরীক্ষায় এর প্রয়োগকে সীমিত করে।

1990 এর দশকের গোড়ার দিকে, অনেক পরীক্ষাগার ধ্রুবক তাপমাত্রা পরিবর্ধন প্রযুক্তি বিকাশ করতে শুরু করেছে যার জন্য তাপীয় বিকৃতির প্রয়োজন হয় না।এখন তারা লুপ-মিডিয়াটেড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি, স্ট্র্যান্ড রিপ্লেসমেন্ট আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি, রোলিং সার্কেল আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি এবং নিউক্লিক অ্যাসিড সিকোয়েন্স নির্ভরতা তৈরি করেছে।আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি এবং অন্যান্য প্রযুক্তি। 

Loop-মধ্যস্থিত আইসোথার্মাল পরিবর্ধন

পরিবর্ধন নীতিটি এই সত্যের উপর ভিত্তি করে যে ডিএনএ প্রায় 65 ডিগ্রি সেলসিয়াসে একটি গতিশীল ভারসাম্যের অবস্থায় রয়েছে।যখন কোনো প্রাইমার বেস-পেয়ার করা হয় এবং ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-এর পরিপূরক অংশে প্রসারিত হয়, তখন অন্য স্ট্র্যান্ডটি বিচ্ছিন্ন হয়ে একক-স্ট্রেন্ডেড হয়ে যায়।

এই তাপমাত্রায়, ডিএনএ 4টি নির্দিষ্ট প্রাইমার ব্যবহার করে একটি স্ট্র্যান্ড-ডিসপ্লেসমেন্ট ডিএনএ পলিমারেজের উপর নির্ভর করে স্ট্র্যান্ড-ডিসপ্লেসমেন্ট ডিএনএর সংশ্লেষণকে ক্রমাগতভাবে স্ব-সঞ্চালন করে।

প্রথমে টার্গেট জিনের উপর 6 টি নির্দিষ্ট অঞ্চল F3, F2, F1, B1, B2, B3 নির্ধারণ করুন এবং তারপর এই 6 টি নির্দিষ্ট অঞ্চলের উপর ভিত্তি করে 4 টি প্রাইমার ডিজাইন করুন (নিচের চিত্রে দেখানো হয়েছে):

ফরোয়ার্ড ইনার প্রাইমার (FIP) F1c এবং F2 দ্বারা গঠিত।

ব্যাকওয়ার্ড ইনার প্রাইমার (BIP) B1c এবং B2 দ্বারা গঠিত এবং TTTT মাঝখানে একটি স্পেসার হিসাবে ব্যবহৃত হয়।

বাইরের প্রাইমারগুলি F3 এবং B3 যথাক্রমে লক্ষ্য জিনের উপর F3 এবং B3 অঞ্চল নিয়ে গঠিত।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি

LAMP প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে, ভিতরের প্রাইমারের ঘনত্ব বাইরের প্রাইমারের কয়েকগুণ বেশি।অভ্যন্তরীণ প্রাইমারটি প্রথমে টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডের সাথে একত্রিত হয় যাতে একটি পরিপূরক স্ট্র্যান্ডকে সংশ্লেষিত করে একটি ডিএনএ ডাবল স্ট্র্যান্ড তৈরি করা হয়।পরবর্তীকালে, বাইরের প্রাইমারটি টেমপ্লেট স্ট্র্যান্ডের সাথে একত্রিত হয়ে একটি DNA ডাবল স্ট্র্যান্ড তৈরি করে।BstDNA পলিমারেজের কর্মের অধীনে, অভ্যন্তরীণ প্রাইমার দ্বারা সংশ্লেষিত পরিপূরক স্ট্র্যান্ড মুক্তি পায়।ধারাবাহিক প্রতিক্রিয়ার পর, পরিপূরক স্ট্র্যান্ড অবশেষে ডাম্বেল কাঠামো সহ একটি একক DNA স্ট্র্যান্ড গঠন করে।

ডাম্বেল স্ট্রাকচার ডিএনএ সিঙ্গেল স্ট্র্যান্ড নিজেই একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা হয় যাতে একটি ট্রানজিশনাল স্টেম-লুপ স্ট্রাকচার ডিএনএ একটি উন্মুক্ত প্রান্তে ক্রমাগত গঠন করে।অভ্যন্তরীণ এবং বাইরের প্রাইমারগুলি ট্রানজিশনাল স্টেম-লুপ স্ট্রাকচার ডিএনএকে ক্রমাগত স্ট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট এবং এক্সটেনশন রিঅ্যাকশনের মধ্য দিয়ে যেতে এবং অবশেষে বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের একাধিক স্টেম-লুপ স্ট্রাকচার তৈরি করার জন্য গাইড করে।ডিএনএ মিশ্রণ।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি2

লুপ-মিডিয়াটেড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশনের সুবিধা এবং অসুবিধা

LAMP এর সুবিধা:

(1) উচ্চ পরিবর্ধন দক্ষতা, যা কার্যকরভাবে লক্ষ্য জিনের 1-10 কপি 1 ঘন্টার মধ্যে প্রসারিত করতে পারে এবং পরিবর্ধন কার্যকারিতা সাধারণ পিসিআরের 10-100 গুণ।

(2) প্রতিক্রিয়া সময় কম, নির্দিষ্টতা শক্তিশালী, এবং কোন বিশেষ সরঞ্জাম প্রয়োজন হয় না।

LAMP এর ত্রুটিগুলি:

(1) প্রাইমারের প্রয়োজনীয়তা বিশেষভাবে বেশি।

(2) পরিবর্ধিত পণ্যটি ক্লোনিং এবং সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য ব্যবহার করা যাবে না, তবে শুধুমাত্র বিচারের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

(3) এর দৃঢ় সংবেদনশীলতার কারণে, এরোসল গঠন করা সহজ, যা মিথ্যা ইতিবাচক সৃষ্টি করে এবং পরীক্ষার ফলাফলকে প্রভাবিত করে।

Sট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট এমপ্লিফিকেশন

স্ট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট এমপ্লিফিকেশন (এসডিএ) হল একটি ইন ভিট্রো আইসোথার্মাল ডিএনএ অ্যামপ্লিফিকেশন কৌশল যা 1992 সালে আমেরিকান পণ্ডিত ওয়াকার দ্বারা প্রথম প্রস্তাবিত এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়ার উপর ভিত্তি করে।

এসডিএ-র মৌলিক ব্যবস্থার মধ্যে রয়েছে একটি সীমাবদ্ধতা এন্ডোনিউক্লিজ, স্ট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট অ্যাক্টিভিটি সহ একটি ডিএনএ পলিমারেজ, দুই জোড়া প্রাইমার, ডিএনটিপি, এবং ক্যালসিয়াম এবং ম্যাগনেসিয়াম আয়ন এবং বাফার সিস্টেম।

স্ট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট অ্যামপ্লিফিকেশন নীতিটি লক্ষ্য ডিএনএর উভয় প্রান্তে রাসায়নিকভাবে পরিবর্তিত সীমাবদ্ধতা এন্ডোনিউক্লিজ স্বীকৃতি ক্রমের উপর ভিত্তি করে।এন্ডোনিউক্লিজ স্ট্র্যান্ড ডিএনএ-র ব্যবধানটি তার স্বীকৃতির স্থানে খুলে দেয় এবং ডিএনএ পলিমারেজ ব্যবধান 3′ শেষ করে এবং পরবর্তী ডিএনএ স্ট্র্যান্ডটি প্রতিস্থাপন করে।

ডিএনএ-র প্রতিস্থাপিত একক স্ট্র্যান্ড প্রাইমারের সাথে একত্রিত করা যেতে পারে এবং ডিএনএ পলিমারেজ দ্বারা ডাবল স্ট্র্যান্ডে প্রসারিত করা যেতে পারে।এই প্রক্রিয়াটি ক্রমাগত পুনরাবৃত্তি হয়, যাতে লক্ষ্য ক্রমটি দক্ষতার সাথে প্রসারিত হয়।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি3

স্ট্র্যান্ড ডিসপ্লেসমেন্ট এমপ্লিফিকেশন প্রযুক্তির সুবিধা এবং অসুবিধা

SDA এর সুবিধা:

পরিবর্ধন দক্ষতা উচ্চ, প্রতিক্রিয়া সময় কম, নির্দিষ্টতা শক্তিশালী, এবং কোন বিশেষ সরঞ্জাম প্রয়োজন হয় না।

এসডিএর ত্রুটিগুলি:

পণ্যগুলি অভিন্ন নয়, এবং কিছু একক-স্ট্রেন্ডেড এবং ডবল-স্ট্র্যান্ডেড পণ্য সবসময় এসডিএ চক্রে উত্পাদিত হয়, এবং ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা শনাক্ত হলে টেলিং অনিবার্যভাবে ঘটবে।

Rওলিং বৃত্ত পরিবর্ধন

রোলিং সার্কেল অ্যামপ্লিফিকেশন (আরসিএ) রোলিং সার্কেল দ্বারা প্যাথোজেনিক জীব থেকে ডিএনএ অনুলিপি করার পদ্ধতির উপর অঙ্কন করে প্রস্তাব করা হয়েছে।এটি একটি ধ্রুবক তাপমাত্রায় একটি টেমপ্লেট হিসাবে একক-স্ট্রান্ডেড বৃত্তাকার ডিএনএ ব্যবহার এবং লক্ষ্য জিনের পরিবর্ধন অর্জনের জন্য ঘূর্ণায়মান বৃত্ত ডিএনএ সংশ্লেষণের ক্রিয়াকলাপের অধীনে একটি বিশেষ ডিএনএ পলিমারেজ (যেমন Phi29) ব্যবহারকে নির্দেশ করে।

RCA কে রৈখিক পরিবর্ধন এবং সূচকীয় পরিবর্ধনে ভাগ করা যায়।রৈখিক RCA এর কার্যকারিতা 10 এ পৌঁছাতে পারে5বার, এবং সূচকীয় RCA এর দক্ষতা 10 এ পৌঁছাতে পারে9বার

সরল পার্থক্য, নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে, রৈখিক পরিবর্ধন a শুধুমাত্র 1টি প্রাইমার ব্যবহার করে, সূচকীয় পরিবর্ধন b টিতে 2টি প্রাইমার রয়েছে।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি4

লিনিয়ার RCA কে একক প্রাইমার RCAও বলা হয়।একটি প্রাইমার বৃত্তাকার ডিএনএর সাথে আবদ্ধ হয় এবং ডিএনএ পলিমারেজের ক্রিয়া দ্বারা প্রসারিত হয়।পণ্যটি একটি রৈখিক একক স্ট্র্যান্ড যা একটি একক লুপের দৈর্ঘ্যের হাজার গুণ পুনরাবৃত্তিমূলক ক্রমগুলির একটি বড় সংখ্যা।

যেহেতু রৈখিক RCA-এর পণ্যটি সর্বদা প্রারম্ভিক প্রাইমারের সাথে সংযুক্ত থাকে, তাই সংকেতটির সহজ স্থিরকরণ একটি প্রধান সুবিধা।

এক্সপোনেনশিয়াল RCA, হাইপার ব্রাঞ্চড এমপ্লিফিকেশন HRCA (হাইপার ব্রাঞ্চড RCA) নামেও পরিচিত, এক্সপোনেনশিয়াল RCA-তে, একটি প্রাইমার RCA প্রোডাক্টকে প্রসারিত করে, দ্বিতীয় প্রাইমার RCA প্রোডাক্টের সাথে হাইব্রিডাইজ করে এবং প্রসারিত করে, এবং রিপ্লেসমেন্ট ইতিমধ্যেই RCA প্রোডাক্টের সাথে আবদ্ধ হয় ডাউনস্ট্রীম প্রাইমারগুলি স্ট্র্যান্ড প্রসারিত করে এবং RCA রিপ্লেসমেন্ট অ্যামপ্লিফিকেশন অ্যামপ্লিফিকেশন উত্পাদন করে।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি5

ঘূর্ণায়মান বৃত্ত নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধনের সুবিধা এবং অসুবিধা

RCA এর সুবিধা:

উচ্চ সংবেদনশীলতা, ভাল নির্দিষ্টতা এবং সহজ অপারেশন।

আরসিএ এর ত্রুটিগুলি:

সংকেত সনাক্তকরণের সময় পটভূমি সমস্যা।আরসিএ প্রতিক্রিয়ার সময়, অপ্রচলিত প্যাডলক প্রোব এবং আনবাউন্ড প্রোবের টেমপ্লেট ডিএনএ বা আরএনএ কিছু পটভূমি সংকেত তৈরি করতে পারে। 

Nucleicacid ক্রম-ভিত্তিক পরিবর্ধন

নিউক্লিক অ্যাসিড সিকোয়েন্স-ভিত্তিক পরিবর্ধন (NASBA) হল একটি নতুন প্রযুক্তি যা PCR-এর ভিত্তিতে তৈরি করা হয়েছে।এটি একটি অবিচ্ছিন্ন এবং আইসোথার্মাল নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধন যা একটি T7 প্রমোটার সিকোয়েন্স সহ এক জোড়া প্রাইমার দ্বারা পরিচালিত হয়।প্রযুক্তিটি টেমপ্লেট RNA কে প্রায় 2 ঘন্টার মধ্যে প্রায় 109 বার প্রসারিত করতে পারে, যা প্রচলিত PCR পদ্ধতির থেকে 1000 গুণ বেশি এবং বিশেষ সরঞ্জামের প্রয়োজন হয় না।

এই প্রযুক্তিটি উপস্থিত হওয়ার সাথে সাথে রোগের দ্রুত নির্ণয়ের জন্য ব্যবহার করা হয়েছে এবং বর্তমানে অনেক কোম্পানি এই পদ্ধতিটি RNA সনাক্তকরণ কিটগুলিতে ব্যবহার করে।

যদিও RNA পরিবর্ধন এছাড়াও বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন পিসিআর প্রযুক্তি ব্যবহার করতে পারে, NASBA এর নিজস্ব সুবিধা রয়েছে: এটি তুলনামূলকভাবে স্থির তাপমাত্রার অবস্থার অধীনে পরিচালিত হতে পারে এবং এটি ঐতিহ্যগত PCR প্রযুক্তির তুলনায় আরো স্থিতিশীল এবং সঠিক।

প্রতিক্রিয়াটি 41 ডিগ্রি সেলসিয়াসে হয় এবং সম্পূর্ণ করার জন্য AMV (এভিয়ান মাইলোব্লাস্টোসিস ভাইরাস) বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ, RNase H, T7 RNA পলিমারেজ এবং এক জোড়া প্রাইমার প্রয়োজন।

প্রক্রিয়া প্রধানত অন্তর্ভুক্ত:

ফরোয়ার্ড প্রাইমারে T7 প্রোমোটারের পরিপূরক ক্রম রয়েছে।বিক্রিয়ার সময়, ফরোয়ার্ড প্রাইমার RNA স্ট্র্যান্ডের সাথে আবদ্ধ হয় এবং AMV এনজাইম দ্বারা অনুঘটক হয়ে DNA-RNA ডাবল স্ট্র্যান্ড তৈরি করে।

RNase H হাইব্রিড ডাবল-স্ট্র্যান্ডে আরএনএ হজম করে এবং একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ ধরে রাখে।

বিপরীত প্রাইমার এবং AMV এনজাইমের কর্মের অধীনে, T7 প্রোমোটার সিকোয়েন্স ধারণকারী একটি DNA ডাবল স্ট্র্যান্ড গঠিত হয়।

T7 RNA পলিমারেজের ক্রিয়াকলাপের অধীনে, ট্রান্সক্রিপশন প্রক্রিয়া সম্পন্ন হয় এবং প্রচুর পরিমাণে লক্ষ্য RNA উৎপন্ন হয়।

নিউক্লিক অ্যাসিড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন প্রযুক্তি6

নাসবার সুবিধা:

(1) এর প্রাইমারের একটি T7 প্রোমোটার সিকোয়েন্স আছে, কিন্তু বিদেশী ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-তে কোন T7 প্রোমোটার সিকোয়েন্স নেই এবং এটিকে বিবর্ধিত করা যায় না, তাই এই প্রযুক্তির উচ্চ নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা রয়েছে।

(2) NASBA সরাসরি বিপরীত প্রতিলিপি প্রক্রিয়াকে পরিবর্ধন বিক্রিয়ায় অন্তর্ভুক্ত করে, প্রতিক্রিয়ার সময়কে ছোট করে।

NASBA এর অসুবিধা:

(1) প্রতিক্রিয়া উপাদানগুলি আরও জটিল।

(2) বিক্রিয়ার খরচ বেশি করতে তিন ধরনের এনজাইমের প্রয়োজন হয়।


পোস্টের সময়: আগস্ট-০৬-২০২১