1. RNA দ্রবণের শোষণ সনাক্ত করুন

280, 320, 230, এবং 260 nm এ শোষণ যথাক্রমে নিউক্লিক অ্যাসিড, পটভূমি (সলিউশন টার্বিডিটি), লবণের ঘনত্ব এবং প্রোটিনের মতো জৈব পদার্থের মানকে প্রতিনিধিত্ব করে।সাধারণত শুধুমাত্র OD260/OD280 (অনুপাত, R) দেখুন।যখন 1.8~2.0, আমরা মনে করি যে RNA-তে প্রোটিন বা অন্যান্য জৈব পদার্থের দূষণ সহ্য করা যেতে পারে, তবে এটি লক্ষ করা উচিত যে যখন ট্রিসকে শোষণ সনাক্ত করতে বাফার হিসাবে ব্যবহার করা হয়, তখন R মান 2 এর বেশি হতে পারে (সাধারণত এটি <2.2 হওয়া উচিত)।যখন R <1.8, দ্রবণে প্রোটিন বা অন্যান্য জৈব পদার্থের দূষণ আরও সুস্পষ্ট হয় এবং আরএনএর ভাগ্য প্রয়োজন অনুসারে নির্ধারণ করা যেতে পারে।যখন R> 2.2, এর মানে RNA একক নিউক্লিক অ্যাসিডে হাইড্রোলাইজ করা হয়েছে।
 
2. RNA এর ইলেক্ট্রোফোরেটিক প্যাটার্ন
সাধারণত, ডিনাচারিং জেলটি আরএনএ ইলেক্ট্রোফোরসিসের জন্য ব্যবহার করা হয়, তবে যদি এটি শুধুমাত্র আরএনএর গুণমান সনাক্ত করার জন্য হয় তবে ডিনাচারিং জেলের প্রয়োজন হয় না এবং সাধারণ অ্যাগারোজ জেল ব্যবহার করা যেতে পারে।ইলেক্ট্রোফোরসিসের উদ্দেশ্য হল 28S এবং 18S ব্যান্ডের অখণ্ডতা এবং তাদের অনুপাত, বা mRNA স্মিয়ারের অখণ্ডতা সনাক্ত করা।সাধারণত, যদি 28S এবং 18S ব্যান্ডগুলি উজ্জ্বল, পরিষ্কার এবং তীক্ষ্ণ হয় (ব্যান্ডগুলির প্রান্তগুলিকে বোঝানো হয়), এবং 28S-এর উজ্জ্বলতা 18S ব্যান্ডের দ্বিগুণেরও বেশি হয়, আমরা RNA-এর মান ভাল বলে বিবেচনা করি।
উপরের দুটি পদ্ধতি আমরা সাধারণত ব্যবহার করি, কিন্তু এই দুটি পদ্ধতির কোনোটিই স্পষ্টভাবে বলতে পারে না যে RNA দ্রবণে অবশিষ্ট RNase আছে কিনা।যদি দ্রবণে খুব অল্প পরিমাণে RNase থাকে, তবে উপরের পদ্ধতিতে এটি সনাক্ত করা আমাদের পক্ষে কঠিন, তবে পরবর্তী বেশিরভাগ এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়া 37 ডিগ্রির উপরে এবং দীর্ঘ সময়ের জন্য সঞ্চালিত হয়।এইভাবে, আরএনএ দ্রবণে যদি খুব কম পরিমাণে RNase থাকে, তবে পরবর্তী পরীক্ষাগুলিতে তাদের ভূমিকা পালন করার জন্য একটি খুব উপযুক্ত পরিবেশ এবং সময় থাকবে এবং অবশ্যই এই সময়ে পরীক্ষাটি ঠান্ডা হবে।নীচে আমরা একটি পদ্ধতি উপস্থাপন করছি যা নিশ্চিত করতে পারে যে RNA দ্রবণে অবশিষ্ট RNase আছে কিনা।
 
3. তাপ সংরক্ষণ পরীক্ষা
নমুনা ঘনত্ব অনুসারে, RNA দ্রবণ থেকে দুটি 1000 ng RNA আঁকুন এবং এটিকে একটি 0.5 মিলি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে যোগ করুন এবং এটিকে pH 7.0 Tris বাফারের সাথে 10 ul এর মোট আয়তনে পরিপূরক করুন এবং তারপর টিউবের ক্যাপটি সিল করুন।তাদের একটিকে 70 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় একটি ধ্রুবক তাপমাত্রার জলের স্নানে রাখুন এবং এটি 1 ঘন্টার জন্য উষ্ণ রাখুন।অন্য অংশটি 1 ঘন্টার জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।সময় শেষ হলে, ইলেক্ট্রোফোরসিসের জন্য দুটি নমুনা সরান।ইলেক্ট্রোফোরেসিস সম্পন্ন হওয়ার পরে, দুটির ইলেক্ট্রোফোরেটিক ব্যান্ডের তুলনা করুন।যদি দুটির ব্যান্ড সামঞ্জস্যপূর্ণ হয় বা কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য না থাকে (অবশ্যই, তাদের ব্যান্ডগুলিও পদ্ধতি 2-এর শর্ত পূরণ করে), এর মানে হল RNA দ্রবণে কোন অবশিষ্ট RNase দূষণ নেই, এবং RNA-এর মান খুব ভাল।বিপরীতে, যদি 70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউব করা নমুনাটি সুস্পষ্ট অবনতি দেখায় তবে এটি নির্দেশ করে যে RNA দ্রবণে RNase দূষণ রয়েছে।
 
2 RNA নিষ্কাশনের জন্য পরীক্ষামূলক পদ্ধতি এবং কৌশল
আরএনএ বের করার সময় আমরা প্রায়ই যে সমস্যার সম্মুখীন হই: (1) আরএনএ ফলন কম;(2) RNA এর মারাত্মক লবণ দূষণ রয়েছে;(3) আরএনএতে গুরুতর জৈব দ্রাবক দূষণ রয়েছে;(4) নমুনা অবক্ষয় এবং অন্যান্য সমস্যা
 
1. সাধারণত ব্যবহৃত মোট RNA নিষ্কাশন বিকারক
গুয়ানিডিন আইসোথিওসায়ানেট পদ্ধতি এবং ট্রিজল পদ্ধতি হল প্রাণীর টিস্যু এবং প্রাণী কোষ থেকে মোট আরএনএ নিষ্কাশনের জন্য সর্বাধিক ব্যবহৃত পদ্ধতি।এটি বিশেষত ছোট নমুনা এবং টিস্যুগুলির জন্য উপযুক্ত যা বিশেষভাবে নিষ্কাশন করা কঠিন, যেমন খরগোশের চামড়া এবং প্রাণীর সংযোজক টিস্যু থেকে মোট RNA নিষ্কাশন;উপরন্তু, Trizol, একটি সাধারণ-উদ্দেশ্য lysis বিকারক হিসাবে, এছাড়াও উদ্ভিদ টিস্যু, ব্যাকটেরিয়া, ছত্রাক এবং অন্যান্য টিস্যু নিষ্কাশন জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে.পলিস্যাকারাইড এবং পলিফেনল ধারণকারী উদ্ভিদের টিস্যু, যেমন ক্যামেলিয়া ওলিফেরা, চা পাতা, রেপসিড ইত্যাদির জন্য, CTAB পদ্ধতিটি মোট RNA বের করতেও ব্যবহার করা যেতে পারে।

একটি প্রচলিত পদ্ধতি হিসাবে, ডাবল-কলাম পদ্ধতিটি খুব জনপ্রিয় কারণ এটির স্বাভাবিক তাপমাত্রার ক্রিয়াকলাপ, RNase যোগ করার প্রয়োজন নেই এবং নিরাপত্তা - নিষ্কাশনের জন্য ক্লোরোফর্ম, ফেনল এবং অন্যান্য জৈব বিকারক নেই।(প্রস্তাবিত পণ্য )