• ফেসবুক
  • লিঙ্কডইন
  • ইউটিউব

 ফ্লুরোসেন্স কোয়ান্টিটেটিভ PCR (এছাড়াও TaqMan PCR নামে পরিচিত, এরপরে FQ-PCR নামে পরিচিত) হল 1995 সালে মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে PE (Perkin Elmer) দ্বারা বিকশিত একটি নতুন নিউক্লিক অ্যাসিড পরিমাণগত প্রযুক্তি। এই প্রযুক্তিটি ফ্লুরোসেন্ট লেবেলযুক্ত প্রো যোগ করে প্রচলিত PCR-এর উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে।নমনীয় পিসিআর-এর সাথে তুলনা করে, FQ-PCR এর পরিমাণগত কার্যকারিতা উপলব্ধি করার জন্য অনেক সুবিধা রয়েছে।এই নিবন্ধটি প্রযুক্তির বৈশিষ্ট্য, নীতি, পদ্ধতি এবং প্রয়োগগুলিকে সংক্ষেপে বর্ণনা করতে চায়।

1 বৈশিষ্ট্য

এফকিউ-পিসিআর-এর শুধুমাত্র সাধারণ পিসিআর-এর উচ্চ সংবেদনশীলতাই নয়, ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের প্রয়োগের কারণে, এটি ফোটোইলেকট্রিক পরিবাহী ব্যবস্থার মাধ্যমে পিসিআর পরিবর্ধনের সময় ফ্লুরোসেন্ট সংকেতের পরিবর্তনকে সরাসরি সনাক্ত করতে পারে যাতে পরিমাণগত ফলাফল পাওয়া যায়, যা প্রচলিত পিসিআর-এর অনেক ত্রুটিগুলি কাটিয়ে ওঠে, তাই এটিতে উচ্চ ডিএনএ-পিসিআর প্রযুক্তির উচ্চ স্পেকটিও রয়েছে।

উদাহরণস্বরূপ, সাধারণ পিসিআর পণ্যগুলিকে অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং ইথিডিয়াম ব্রোমাইড স্টেনিং অতিবেগুনী আলোর দ্বারা বা পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং সিলভার স্টেনিং দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা প্রয়োজন।এর জন্য শুধুমাত্র একাধিক যন্ত্রের প্রয়োজন হয় না, সময় এবং প্রচেষ্টাও লাগে।ইথিডিয়াম ব্রোমাইড ব্যবহৃত দাগ মানবদেহের জন্য ক্ষতিকর, এবং এই জটিল পরীক্ষামূলক পদ্ধতিগুলি দূষণ এবং মিথ্যা ইতিবাচক হওয়ার সুযোগ দেয়।যাইহোক, নমুনা লোড করার সময় FQ-PCR-কে শুধুমাত্র একবার ঢাকনা খুলতে হবে, এবং পরবর্তী প্রক্রিয়াটি সম্পূর্ণরূপে বন্ধ-টিউব অপারেশন, যার জন্য PCR পোস্ট-প্রসেসিংয়ের প্রয়োজন হয় না, প্রচলিত PCR অপারেশনগুলিতে অনেক ত্রুটিগুলি এড়িয়ে যায়।পরীক্ষাটি সাধারণত PE কোম্পানি দ্বারা তৈরি ABI7100 PCR তাপ সাইক্লার ব্যবহার করে।

যন্ত্রটির নিম্নলিখিত বৈশিষ্ট্য রয়েছে: ① ব্যাপক প্রয়োগ: এটি ডিএনএ এবং আরএনএ পিসিআর পণ্যের পরিমাণ নির্ধারণ, জিনের প্রকাশ গবেষণা, প্যাথোজেন সনাক্তকরণ এবং পিসিআর অবস্থার অপ্টিমাইজেশনের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।② অনন্য পরিমাণগত নীতি: ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত প্রোব ব্যবহার করে, লেজার উত্তেজনার পরে পিসিআর চক্রের সাথে ফ্লুরোসেন্সের পরিমাণ জমা হবে, যাতে পরিমাণ নির্ধারণের উদ্দেশ্য অর্জন করা যায়।③ উচ্চ কাজের দক্ষতা: অন্তর্নির্মিত 9600 PCR তাপ সাইক্লার, কম্পিউটার নিয়ন্ত্রিত 1 থেকে 2 ঘন্টা স্বয়ংক্রিয়ভাবে এবং সিনক্রোনাসভাবে 96টি নমুনার পরিবর্ধন এবং পরিমাপ সম্পূর্ণ করতে।④ জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসের প্রয়োজন নেই: নমুনাটি পাতলা এবং ইলেক্ট্রোফোরসিস করার দরকার নেই, প্রতিক্রিয়া টিউবে সরাসরি সনাক্ত করতে একটি বিশেষ প্রোব ব্যবহার করুন।⑤ পাইপলাইনে কোন দূষণ নেই: অনন্য সম্পূর্ণরূপে আবদ্ধ প্রতিক্রিয়া টিউব এবং আলোক বৈদ্যুতিক পরিবাহী ব্যবস্থা গ্রহণ করা হয়েছে, তাই দূষণ সম্পর্কে চিন্তা করার দরকার নেই।⑥ ফলাফলগুলি পুনরুত্পাদনযোগ্য: পরিমাণগত গতিশীল পরিসীমা পাঁচটি ক্রম মাত্রা পর্যন্ত।অতএব, যেহেতু এই প্রযুক্তিটি সফলভাবে বিকশিত হয়েছে, এটি অনেক বৈজ্ঞানিক গবেষকদের দ্বারা মূল্যবান এবং অনেক ক্ষেত্রে প্রয়োগ করা হয়েছে।

2 নীতি ও পদ্ধতি

এফকিউ-পিসিআর-এর কাজের নীতি হল পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে একটি ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত প্রোব যোগ করতে Taq এনজাইমের 5′→3′ এক্সোনিউক্লিজ কার্যকলাপ ব্যবহার করা।প্রোবটি প্রাইমার সিকোয়েন্সে থাকা ডিএনএ টেমপ্লেটের সাথে বিশেষভাবে হাইব্রিডাইজ করতে পারে।প্রোবের 5′প্রান্তে ফ্লুরোসেন্স নির্গমন জিন FAM (6-কারবক্সিফ্লুরেসিন, 518nm এ ফ্লুরোসেন্স নির্গমন পিক) লেবেল করা হয়েছে, এবং 3′প্রান্তে ফ্লুরোসেন্স quenching গ্রুপ TAMRA (6-carboxyttrammy, ফ্লুরোসেন্স 518nm) লেবেল করা হয়েছে, PCR পরিবর্ধনের সময় প্রোবকে প্রসারিত করা থেকে রোধ করার জন্য প্রোবের শুরুতে ফসফরিলেট করা হয়।যখন প্রোব অক্ষত থাকে, quencher গ্রুপ নির্গত গ্রুপের ফ্লুরোসেন্স নির্গমনকে দমন করে।নির্গমনকারী গোষ্ঠীটি নিভে যাওয়ার গ্রুপ থেকে বিচ্ছিন্ন হয়ে গেলে, নিষেধাজ্ঞা তুলে নেওয়া হয়, এবং 518nm-এ অপটিক্যাল ঘনত্ব বৃদ্ধি পায় এবং ফ্লুরোসেন্স ডিটেকশন সিস্টেম দ্বারা সনাক্ত করা হয়। পুনর্নবীকরণ পর্বে, প্রোবটি টেমপ্লেট ডিএনএর সাথে সংকরিত হয়, এবং এক্সটেনশনের প্রাইম ফেজ ডিএনএ-এর সাথে টাক এনজাইম এক্সটেনশনের সাথে সংকরিত হয়।যখন প্রোবটি কেটে ফেলা হয়, তখন quenching প্রভাব প্রকাশিত হয় এবং ফ্লুরোসেন্ট সংকেত প্রকাশিত হয়।প্রতিবার টেমপ্লেটটি অনুলিপি করা হলে, একটি প্রোব কেটে ফেলা হয়, একটি ফ্লুরোসেন্ট সংকেত প্রকাশের সাথে থাকে।যেহেতু প্রকাশিত ফ্লুরোফোরের সংখ্যা এবং পিসিআর পণ্যের সংখ্যার মধ্যে এক-এক সম্পর্ক রয়েছে, তাই এই কৌশলটি টেমপ্লেটটি সঠিকভাবে পরিমাপ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।পরীক্ষামূলক যন্ত্রটি সাধারণত PE কোম্পানির দ্বারা তৈরি ABI7100 PCR তাপ সাইক্লার ব্যবহার করে এবং অন্যান্য তাপ সাইক্লারগুলিও ব্যবহার করা যেতে পারে।ABI7700 প্রতিক্রিয়া টাইপ প্রতিক্রিয়া সিস্টেম পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হলে, প্রতিক্রিয়া সম্পন্ন হওয়ার পরে, পরিমাণগত ফলাফল সরাসরি কম্পিউটার বিশ্লেষণের মাধ্যমে দেওয়া যেতে পারে।আপনি যদি অন্য থার্মাল সাইক্লার ব্যবহার করেন, তাহলে RQ+, RQ-, △RQ গণনা করতে একই সময়ে প্রতিক্রিয়া টিউবে ফ্লুরোসেন্স সংকেত পরিমাপ করতে আপনাকে একটি ফ্লুরোসেন্স ডিটেক্টর ব্যবহার করতে হবে।RQ+ নমুনা টিউবের ফ্লুরোসেন্ট নিঃসরণ গোষ্ঠীর লুমিনেসেন্স তীব্রতার অনুপাতকে নিঃসরণকারী গোষ্ঠীর লুমিনেসেন্স তীব্রতার সাথে প্রতিনিধিত্ব করে, RQ- ফাঁকা টিউবের মধ্যে দুটির অনুপাতকে প্রতিনিধিত্ব করে, △RQ (△RQ=RQ+-RQ-) প্রতিনিধিত্ব করে পিসিআর ফ্লু প্রক্রিয়ার সময় ফ্লুর চিহ্নের পরিমান সিগন্যাল পরিবর্তিত ফলাফলের পরে। .ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের প্রবর্তনের কারণে, পরীক্ষার নির্দিষ্টতা উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছে।প্রোবের নকশা সাধারণত নিম্নলিখিত শর্তগুলি পূরণ করা উচিত: ① বাইন্ডিংয়ের নির্দিষ্টতা নিশ্চিত করতে প্রোবের দৈর্ঘ্য প্রায় 20-40 বেস হওয়া উচিত।②একক নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্সের ডুপ্লিকেশন এড়াতে GC বেসের বিষয়বস্তু 40% থেকে 60% এর মধ্যে।③ হাইব্রিডাইজেশন এড়িয়ে চলুন বা প্রাইমারের সাথে ওভারল্যাপ করুন।④ প্রোব এবং টেমপ্লেটের মধ্যে বাঁধাইয়ের স্থায়িত্ব প্রাইমার এবং টেমপ্লেটের মধ্যে বাঁধাইয়ের স্থায়িত্বের চেয়ে বেশি, তাই প্রোবের Tm মান প্রাইমারের Tm মানের থেকে কমপক্ষে 5°C বেশি হওয়া উচিত।উপরন্তু, প্রোবের ঘনত্ব, প্রোব এবং টেমপ্লেট সিকোয়েন্সের মধ্যে সমতা এবং প্রোব এবং প্রাইমারের মধ্যে দূরত্ব সবই পরীক্ষামূলক ফলাফলের উপর প্রভাব ফেলে।

সংশ্লিষ্ট পণ্য:

চায়না Lnc-RT Heroᵀᴹ I(gDNase সহ)(lncRNA থেকে প্রথম-স্ট্র্যান্ড cDNA সংশ্লেষণের জন্য সুপার প্রিমিক্স) প্রস্তুতকারক এবং সরবরাহকারী |Foregene (foreivd.com)

চায়না রিয়েল টাইম PCR Easyᵀᴹ-Takman প্রস্তুতকারক এবং সরবরাহকারী |Foregene (foreivd.com)


পোস্টের সময়: অক্টোবর-15-2021